本文關(guān)鍵詞：產(chǎn)堿假單胞菌降解地塞米松相關(guān)蛋白酶的研究

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【摘要】：目的：本文在從醫(yī)院廢水中分離到一株可降解地塞米松磷酸鈉和地塞米松的產(chǎn)堿假單胞菌的基礎(chǔ)上,進一步分離提取與該菌降解有關(guān)的蛋白酶,并探討其特性,為制備清除環(huán)境中地塞米松類藥物污染的生物凈化劑奠定基礎(chǔ)。方法：將分離的降解地塞米松的產(chǎn)堿假單胞菌在地塞米松磷酸鈉培養(yǎng)液長期反復(fù)培養(yǎng)訓(xùn)化,以提高該菌對地塞米松的降解率。再用滲透休克法提取該菌的胞外蛋白、周質(zhì)蛋白和胞內(nèi)蛋白,SDS-PAGE電泳分析提取的各部位蛋白,對主要蛋白進行質(zhì)譜鑒定。用高效液相色譜法(HPLC)檢測各部位蛋白的降解酶活性,以確定降解酶存在的部位。對具有酶活性的胞內(nèi)蛋白先用硫酸銨鹽析,再用離子交換層析與葡聚糖凝膠層析相結(jié)合的方法進一步提取純化。用]HPLC法檢測在純化過程中蛋白酶的降解活性,用BCA法檢測蛋白濃度,再計算出比活力,純化倍數(shù)及回收率。將純化后的蛋白酶切后質(zhì)譜鑒定,并測定其降解反應(yīng)的動力學(xué)特征。結(jié)果：地塞米松降解菌經(jīng)多次馴化后,對地塞米松磷酸鈉的降解率從馴化前的50.89%提高到75.7%,將地塞米松降解為其它物質(zhì)的降解率從23.63%提高到74.99%。馴化菌在馴化前后對地塞米松磷酸鈉與地塞米松的降解有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。在常規(guī)培養(yǎng)條件下對地塞米松磷酸鈉與地塞米松也有顯著的降解作用。從馴化菌提取到分子量約為100kDa,41kDa及20kDa三種主要蛋白質(zhì),質(zhì)譜鑒定分別與TonB依賴性受體蛋白,異戊酰輔酶A脫氫酶和假定蛋白有較高的相似性。馴化菌的胞內(nèi)蛋白具有較高的降解酶活性。從胞內(nèi)蛋白中提取純化到41kDa蛋白,質(zhì)譜鑒定與異戊酰輔酶A脫氫酶有較高的相似性。降解酶在溫度25℃-40℃和pH6.5-pH8.5條件下具有較好的降解作用,酶促反應(yīng)動力學(xué)方程為Ct-C0 e-0.1769t,符合一級動力學(xué)方程。結(jié)論：本文成功馴化了所分離的地塞米松降解菌,明確了降解酶所存在的部位。成功提取了馴化菌的主要蛋白,明確了這些蛋白的性質(zhì)。提取純化了胞內(nèi)蛋白中的降解酶,了解了酶蛋白的降解特性,構(gòu)建了酶促反應(yīng)動力學(xué)方程。為進一步制備清除環(huán)境中地塞米松類藥物污染的生物凈化劑提供了實驗材料和理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：產(chǎn)堿假單胞菌 馴化 地塞米松 蛋白質(zhì) 降解酶 特性
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R915
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一部分 地塞米松降解菌的馴化和降解特性13-23
• 1 材料與方法13-17
• 2 結(jié)果17-22
• 3 討論22-23
• 第二部分 馴化菌主要蛋白的提取23-34
• 1 材料與方法23-26
• 2 結(jié)果26-32
• 3 討論32-34
• 第三部分 地塞米松降解酶的純化鑒定及特性34-48
• 1 材料與方法34-38
• 2 結(jié)果38-45
• 3 討論45-48
• 全文總結(jié)48-50
• 參考文獻50-54
• 文獻綜述54-64
• 參考文獻60-64
• 致謝64-65
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果65

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本文編號：856384