本文關鍵詞：ABCC2基因過表達細胞株的建立及鑒定

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【摘要】：目的構建攜帶ABCC2基因的慢病毒載體,轉染HEK293細胞,篩選出穩(wěn)定過表達ABCC2基因的細胞株并進行鑒定,為體外實驗確定與多藥耐藥相關蛋白2(MRP2)外排轉運相關的底物藥物及其轉運機制提供細胞模型。方法根據Gen Bank提供的ABCC2基因c DNA序列設計引物,PCR擴增該基因并將其連接至慢病毒載體PZE-LV105,包裝病毒并感染HEK293細胞。用嘌呤霉素進行篩選得到過表達ABCC2基因的穩(wěn)轉細胞株,通過基因測序、實時熒光定量PCR(RTQ-PCR)和蛋白免疫印跡(Western blot)對穩(wěn)轉細胞進行鑒定。結果測序結果證明重組慢病毒過表達載體所攜帶的ABCC2基因序列與GenBank提供的ABCC2序列一致;RTQ-PCR分析結果顯示轉染了ABCC2基因的HEK293細胞中MRP2的mRNA相對表達比正常HEK293細胞和空白載體對照HEK293細胞高出約320倍;蛋白免疫印跡試驗顯示,轉染了ABCC2基因的HEK293細胞中MRP2蛋白表達水平比正常HEK293細胞和空白載體對照HEK293細胞高出約150倍。結論該實驗成功構建了穩(wěn)定過表達ABCC2基因的細胞株,該細胞株可用于初步篩選確定MRP2的特異性外排轉運底物及其轉運機制。
【作者單位】： 武漢大學人民醫(yī)院藥學部;
【關鍵詞】： ABCC基因 過表達 慢病毒載體 HEK細胞
【分類號】：R96
【正文快照】： ABCC2基因編碼的蛋白質是一種ATP結合盒轉運蛋白,一般稱作ABCC2轉運蛋白或者多藥耐藥相關蛋白2(MRP2)。該蛋白主要分布在肝臟、膽囊、腎臟、小腸和結腸等組織細胞[1],負責外排轉運特異性底物,尤其在很多治療性藥物和有毒性外源性物質的膽汁排泄中發(fā)揮重要作用[2-4]。雖然AB-CC

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1 辛華雯;劉慧明;李元啟;黃暉;趙麗;余愛榮;李罄;吳笑春;李維亮;熊磊;;ABCC2基因多態(tài)性與腎移植受者環(huán)孢素所致肝功能異常的相關性研究[J];中國臨床藥理學與治療學;2013年07期

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本文編號：825199