本文關(guān)鍵詞：熱穩(wěn)定酯酰輔酶A合成酶的異源表達(dá)及酶學(xué)特性

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【摘要】：【目的】為尋找能合成丙酰輔酶A和丁酰輔酶A等聚酮合成前體的生物催化劑,用體外酶學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)一個(gè)酯酰輔酶A合成酶進(jìn)行了表征。【方法】利用丙二酰輔酶A合成酶作為輸入序列,通過(guò)BLAST程序在Caldicellulosiruptor owensensis OL的基因組中找到1個(gè)酯酰輔酶A合成酶基因。在大腸桿菌中進(jìn)行了異源表達(dá),并通過(guò)親和層析進(jìn)行純化。底物譜、最適反應(yīng)條件、穩(wěn)定性和動(dòng)力學(xué)參數(shù)通過(guò)體外酶學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行表征,而定點(diǎn)突變則用于活性中心的氨基酸殘基的分析�！窘Y(jié)果】該酶具有較好的底物寬泛性,可識(shí)別丙酸、丁酸、2-甲基丙酸、戊酸、3-甲基丁酸、2-甲基丁酸以及環(huán)己甲酸等一系列單酸。反應(yīng)最適溫度為30°C,最適p H為7.0。70°C保溫8 h后仍有45%的活性殘留,表明該酶相對(duì)比較穩(wěn)定。通過(guò)活性中心3個(gè)位點(diǎn)的定點(diǎn)突變可以改變酶的底物特異性�！窘Y(jié)論】C.owensensis OL來(lái)源的酯酰輔酶A合成酶是潛在的生物催化劑,可以用于聚酮前體的合成。
【作者單位】： 中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所生化工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)科學(xué)院大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 熱穩(wěn)定性 酯酰輔酶A合成酶 底物特異性 酶學(xué)性質(zhì) 定點(diǎn)突變
【基金】：國(guó)家“973計(jì)劃”(2013CB734000) 國(guó)家自然科學(xué)基金(31370101,31570056) 北京市自然科學(xué)基金(5144031) 青年千人計(jì)劃和中國(guó)科學(xué)院?jiǎn)?dòng)資金~~
【分類(lèi)號(hào)】：R914
【正文快照】： 聚酮是由細(xì)菌、真菌及植物等產(chǎn)生的一大類(lèi)結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣的天然產(chǎn)物,在現(xiàn)代醫(yī)療中發(fā)揮重要作用,如抗感染、抗腫瘤以及免疫抑制等[1 3]。聚酮的生物合成與脂肪酸類(lèi)似,由輔酶A(coenzyme A,Co A)活化的短鏈酸通過(guò)連續(xù)的脫羧聚合形成聚酮核心骨架,再經(jīng)一系列復(fù)雜的后修飾而形成,如

【相似文獻(xiàn)】

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1 黃欣;朱碧云;呂帶弟;陳偉立;黃曉琳;李浩明;;洛伐他汀合成酶調(diào)控基因lovE和mkH的克隆及其序列分析比較[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào);2009年01期

2 ;[J];;年期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 費(fèi)良潤(rùn);結(jié)核分枝桿菌葡糖胺-6-磷酸合成酶的克隆表達(dá)及其性質(zhì)研究[D];西南大學(xué);2008年

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本文編號(hào)：793843