發(fā)布時(shí)間：2017-09-02 23:03

  本文關(guān)鍵詞：基于雙載模式的聚合物膠束用于多西他賽的pH敏感遞送

  更多相關(guān)文章： 雙載模式 聚合物膠束 多西他賽 pH敏感

【摘要】：近年來癌癥的早期診斷技術(shù)和治療干預(yù)技術(shù)迅速發(fā)展,然而癌癥仍是威脅人類生命健康的重大疾病,癌癥治療是最具挑戰(zhàn)性的全球問題之一�；熓侵委煱┌Y的重要手段,尤其對不能接受局部治療(手術(shù)或放療)的腫瘤或轉(zhuǎn)移性腫瘤療效較好。然而,由于化療藥物在全身非選擇性分布,癌癥病人接受化療的同時(shí)正常組織會(huì)受到不同程度損傷,造成不可避免的毒副作用。聚合物膠束是一種由兩親性嵌段共聚物在水中自組裝形成的具有核殼結(jié)構(gòu)的納米遞送載體。作為新型納米給藥系統(tǒng),聚合物膠束可增加難溶性藥物的溶解度；降低血漿蛋白的吸附,穩(wěn)定遞送藥物,增加血液循環(huán)時(shí)間；納米級粒徑(200nm)有助于其利用EPR效應(yīng)蓄積到腫瘤組織,降低對正常組織的毒性。自19世紀(jì)90年代以來,聚合物膠束被廣泛用于遞送抗腫瘤藥物的研究中。2007年,PEG-PLA包載紫杉醇的膠束(Genexol-PM(?))在韓國上市,用于復(fù)發(fā)性或轉(zhuǎn)移性乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌的治療。臨床結(jié)果顯示,與泰素(Taxol(?))相比,Genexol-PM(?)在腫瘤組織有明顯蓄積,治療效果更強(qiáng),并且沒有過敏反應(yīng)和明顯的組織毒性出現(xiàn)。聚合物膠束的載藥方式分為兩種：物理包裹和化學(xué)結(jié)合。物理包裹方法制備過程簡單,條件簡單易控；然而通過此方法制備的膠束載藥量低且體循環(huán)過程中藥物易突釋。化學(xué)結(jié)合法制備的膠束在血液循環(huán)中藥物不易突釋,載藥量可通過調(diào)節(jié)反應(yīng)物比例得到控制；然而,由于藥物與載體通過較穩(wěn)定的化學(xué)鍵連接,膠束到達(dá)靶組織后藥物不易釋放,療效降低。本課題采用課題組前期制備的兩種pH敏感結(jié)合物普朗尼克Pluronic P123-單腙鍵-多西他賽(P123-single-hydrazone-Docetaxel, P123-s-hyd-DTX)和普朗尼克Pluronic P123-雙腙鍵-多西他賽(P123-double-hydrazone-Docetaxel, P123-d-hyd-DTX)作為載體材料,進(jìn)一步物理包封多西他賽(Docetaxel, DTX),使用化學(xué)結(jié)合與物理包裹的雙載策略制備聚合物膠束P123-s-hyd-DTX/DTX和P123-d-hyd-DTX/DTX。與單用化學(xué)結(jié)合或物理包裹方式載藥相比,雙載策略不僅能提高膠束載藥量,還能控制藥物的釋放,即包封的藥物首先釋放以達(dá)到治療濃度,化學(xué)結(jié)合的藥物緩慢釋放以維持有效的治療濃度。本課題制備雙載型膠束所用的兩種結(jié)合物材料均具有pH敏感性,當(dāng)兩種膠束在血液循環(huán)(pH 7.4)時(shí)藥物不易釋放,而通過EPR效應(yīng)蓄積到腫瘤組織時(shí),在弱酸性環(huán)境中腙鍵響應(yīng)性斷裂,膠束解聚,藥物釋放。本課題主要內(nèi)容包括三部分：(1)多西他賽體外含量測定方法的建立；(2)P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的制備與理化性質(zhì)表征；(3)P 123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的體內(nèi)外評價(jià)。主要研究方法和結(jié)果如下：1多西他賽體外含量測定方法的建立本課題采用紫外-可見分光光度法建立了DTX的體外含量測定方法,建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線并對日內(nèi)日間精密度、方法回收率、加樣回收率進(jìn)行了考察,結(jié)果顯示DTX濃度在5-40 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好,精密度、回收率均符合分析要求,能夠滿足DTX體外含量測定要求。2 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的制備與理化性質(zhì)表征本課題選擇薄膜水化法制備了膠束,以結(jié)合物的質(zhì)量、投藥量、水化體積、水化時(shí)間、水化溫度為因素進(jìn)行單因素考察,而后選擇對包封率影響較大的因素設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)篩選最優(yōu)處方與工藝。以最優(yōu)工藝處方分別制備三批P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束,對膠束的微觀形態(tài)、粒徑分布及Zeta電位進(jìn)行了表征,并測定了膠束的包封率及載藥量,用動(dòng)態(tài)光散射粒徑儀測定兩種膠束在血漿中粒徑的變化,從而考察了膠束的血漿穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,本課題制備的兩種膠束粒子形態(tài)圓整,大小均勻無明顯黏連；P123-s-hyd-DTX/DTX膠束的粒徑為(121.63+3.72)nm,PDI=0.32,Zeta電位為(-7.50+0.55)mV,包封率為(88.30±2.11)%,載藥量為(14.87+0.10)%；P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的粒徑為(110.37+9.03)nm,PDI=0.39,Zeta電位為(-4.27+0.34)mV,包封率為(83.06+2.73)%,載藥量為(12.64±0.12)%；血漿穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明兩種膠束在實(shí)驗(yàn)條件下可維持穩(wěn)定達(dá)12 h。3 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的體內(nèi)外評價(jià)本課題采用動(dòng)態(tài)膜透析法考察了兩種聚合物膠束的pH敏感性,并比較含單腙鍵膠束和含雙腙鍵膠束的釋藥行為。以B16F10黑色素瘤細(xì)胞為模型細(xì)胞,利用MTT法對載體材料Pluronic P123及兩種聚合物膠束進(jìn)行了評價(jià),并與游離藥比較。給雌性昆明小鼠接種B16F10黑色素瘤細(xì)胞,選用造模成功的小鼠評價(jià)了兩種聚合物膠束的體內(nèi)抗腫瘤效果,并與上市多西他賽注射液比較；對腫瘤組織進(jìn)行HE染色,觀察各給藥組腫瘤組織的變化。本課題最后對兩種聚合物膠束的體外溶血性進(jìn)行了考察；體內(nèi)藥效試驗(yàn)結(jié)束后對各組小鼠正常器官組織進(jìn)行HE染色,觀察了各組織的生理變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,兩種膠束均具有明顯的pH敏感釋藥特性。在pH6.5條件下,P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的累積釋放量遠(yuǎn)大于P123-s-hyd-DTX/DTX膠束,說明P123-d-hyd-DTX/DTX膠束具有較高的pH響應(yīng)性。MTT實(shí)驗(yàn)中兩種膠束都表現(xiàn)出濃度依賴性細(xì)胞毒作用。較低濃度時(shí),游離DTX的細(xì)胞毒性高于兩種膠束(p0.05)；隨著藥物濃度增加,兩種膠束顯示與游離DTX相當(dāng)?shù)募?xì)胞毒性。體內(nèi)抗腫瘤活性研究中,與生理鹽水相比,兩種膠束能夠顯著抑制腫瘤的生長p0.01),且小鼠體重沒有明顯下降(p0.01)。腫瘤組織HE染色結(jié)果表明相比于生理鹽水,多西他賽注射液和膠束均能明顯破壞腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu),且兩種膠束的抑瘤效果更明顯。體外溶血性實(shí)驗(yàn)和正常組織的切片實(shí)驗(yàn)表明P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束無明顯溶血現(xiàn)象,且正常組織沒有產(chǎn)生明顯病變。本課題采用雙載模式制備的兩種聚合物膠束P123-s-hyd-DTX/DTX和P123-d-hyd-DTX/DTX具有較高的抑瘤效果和較低的組織毒性,為DTX新型膠束制劑的臨床應(yīng)用提供一定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：雙載模式 聚合物膠束 多西他賽 pH敏感
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R943
【目錄】：

• 中文摘要12-15
• ABSTRACT15-19
• 符號說明19-21
• 前言21-27
• 第一章 多西他賽體外含量測定方法的建立27-35
• 一、試驗(yàn)材料27-28
• 1 試劑與藥品27-28
• 2 主要儀器28
• 二、實(shí)驗(yàn)方法28-29
• 1 DTX含量測定方法學(xué)考察28-29
• 1.1 確定檢測波長28
• 1.2 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線28
• 1.3 精密度實(shí)驗(yàn)28-29
• 1.4 方法回收率實(shí)驗(yàn)29
• 1.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)29
• 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-33
• 1 DTX含量測定方法學(xué)考察29-33
• 1.1 檢測波長的確定29-31
• 1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立31-32
• 1.3 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-33
• 1.4 方法回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果33
• 1.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果33
• 四、討論33-34
• 五、本章小結(jié)34-35
• 第二章 聚合物膠束的制備與理化性質(zhì)表征35-53
• 一、實(shí)驗(yàn)材料36-37
• 1 試劑與藥品36
• 2 主要儀器36-37
• 二、實(shí)驗(yàn)方法37-40
• 1 聚合物膠束的制備工藝與處方研究37-39
• 1.1 單因素考察聚合物膠束的處方工藝37-38
• 1.2 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化聚合物膠束的工藝處方38-39
• 2 聚合物膠束的理化性質(zhì)研究39-40
• 2.1 電鏡形態(tài)觀察39
• 2.2 粒徑分布及Zeta電位的測定39
• 2.3 包封率和載藥量的測定39-40
• 3 聚合物膠束在血漿中的穩(wěn)定性40
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-51
• 1 聚合物膠束的處方工藝研究結(jié)果40-46
• 1.1 單因素考察結(jié)果40-43
• 1.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-46
• 2 聚合物膠束理化性質(zhì)研究結(jié)果46-48
• 2.1 電鏡觀察結(jié)果46-47
• 2.2 粒徑分布及Zeta電位測定結(jié)果47-48
• 2.3 包封率和載藥量測定結(jié)果48
• 3 聚合物膠束血漿穩(wěn)定性考察結(jié)果48-51
• 四、討論51-52
• 五、本章小結(jié)52-53
• 第三部分 聚合物膠束的體內(nèi)外評價(jià)53-87
• 一、試驗(yàn)材料53-55
• 1 試劑與藥品54
• 2 主要儀器54
• 3 主要溶液配制54-55
• 3.1 培養(yǎng)細(xì)胞用無菌PBS(pH 7.4)的配制54
• 3.2 MTT溶液的配制54-55
• 4 細(xì)胞與動(dòng)物55
• 二、實(shí)驗(yàn)方法55-61
• 1 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束體外釋放研究55-58
• 1.1 DTX體外釋放方法學(xué)建立55-56
• 1.2 DTX-LEV體外釋放方法學(xué)建立56-57
• 1.3 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束在不同pH值釋放介質(zhì)中釋放度測定57-58
• 2 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)58
• 3 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束體內(nèi)抗腫瘤活性研究58-59
• 3.1 建立動(dòng)物模型58-59
• 3.2 體內(nèi)抗腫瘤活性研究59
• 3.3 腫瘤組織切片實(shí)驗(yàn)59
• 4 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的溶血實(shí)驗(yàn)及正常組織切片實(shí)驗(yàn)59-61
• 4.1 溶血性實(shí)驗(yàn)60-61
• 4.2 正常組織切片實(shí)驗(yàn)61
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果61-84
• 1 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束體外釋放研究61-75
• 1.1 DTX體外釋放方法學(xué)的建立61-67
• 1.2 DTX-LEV體外釋放方法學(xué)建立67-73
• 1.3 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束在不同pH釋放介質(zhì)中釋放度的測定73-75
• 2 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束體外細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果75-76
• 3 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的體內(nèi)抗腫瘤活性研究76-80
• 3.1 體內(nèi)抗腫瘤活性研究結(jié)果77-79
• 3.2 腫瘤組織切片實(shí)驗(yàn)結(jié)果79-80
• 4 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的溶血實(shí)驗(yàn)及正常組織切片實(shí)驗(yàn)80-84
• 4.1 體外溶血性實(shí)驗(yàn)結(jié)果80-83
• 4.2 正常組織切片實(shí)驗(yàn)結(jié)果83-84
• 四、討論84-85
• 五、本章小結(jié)85-87
• 總結(jié)和展望87-90
• 參考文獻(xiàn)90-94
• 致謝94-95
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄95-96
• 學(xué)位論文評閱及答辯倩況表96

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王志鋼;臧琛;李慧;張保獻(xiàn);;兩親性嵌段聚合物膠束作為藥物載體的研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2011年19期

2 李紅霞;吳莉莉;宋佳;張業(yè)旺;;聚合物膠束在藥物傳輸系統(tǒng)中的應(yīng)用[J];材料導(dǎo)報(bào);2013年13期

3 王艷萍;郝紅;韋雄雄;樊安;張粉艷;;聚合物膠束的研究及應(yīng)用進(jìn)展[J];離子交換與吸附;2013年06期

4 陳芳;李娟;;聚合物膠束載藥制備方法研究進(jìn)展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2014年08期

5 余敬謀;吳家忠;王新石;金一;;核交聯(lián)聚合物膠束遞藥系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2014年02期

6 左靖;楊明;李淼;杜麗娜;金義光;;吉西他濱脂質(zhì)衍生物聚合物膠束的制備及其理化性質(zhì)和抗腫瘤活性[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2014年03期

7 徐暉,丁平田,王紹寧,鄧意輝,鄭俊民;聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2004年10期

8 鄧字宇;劉先昊;張蒙夏;唐圣松;;聚合物膠束在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用及研究進(jìn)展[J];微量元素與健康研究;2012年02期

9 潘丹;趙燕軍;王征;;星形聚合物膠束作為藥物載體的研究進(jìn)展[J];國際藥學(xué)研究雜志;2012年04期

10 張庭;周建平;姚靜;;阿霉素聚合物膠束的制備及其體外特性評價(jià)[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年05期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 范孝寅;;新型藥物載體聚合物膠束在我國研究的現(xiàn)狀[A];2009年中國藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國藥師周論文集[C];2009年

2 肖玲;孫曉輝;陳華兵;朱艷紅;徐輝碧;楊祥良;;聚合物膠束細(xì)胞攝取的膜融合機(jī)制研究[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

3 張建祥;顏美秋;邱利焱;金一;朱康杰;;基于兩親聚膦腈的聚合物膠束的合成及其初步體外評價(jià)[A];“以嶺醫(yī)藥杯”第八屆全國青年藥學(xué)工作者最新科研成果交流會(huì)論文集[C];2006年

4 范孝寅;;新型藥物載體聚合物膠束在我國研究的現(xiàn)狀[A];2010年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

5 楊婷媛;張強(qiáng);;以整合素為靶向的新型聚合物膠束聯(lián)合給藥系統(tǒng)的研究[A];2010年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

6 王永中;李雅娟;張志文;沙先誼;方曉玲;;星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)化紫杉醇聚合物膠束制劑[A];中醫(yī)藥理論與應(yīng)用研究——安徽中醫(yī)藥繼承與創(chuàng)新博士科技論壇論文集[C];2008年

7 楊婷媛;張強(qiáng);;以整合素為靶向的新型聚合物膠束聯(lián)合給藥系統(tǒng)的研究[A];2009年中國藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國藥師周論文集[C];2009年

8 敖麗嬌;黃亮;粟武;;肝素-葉酸復(fù)合膠束用于MRI及雙靶向藥物運(yùn)輸[A];中國化學(xué)會(huì)第29屆學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集——第33分會(huì)：納米材料合成與組裝[C];2014年

9 聶淑瑜;章莉娟;;pH敏感聚合物膠束載藥和釋放行為的介觀模擬[A];中國化學(xué)會(huì)第29屆學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集——第18分會(huì)：超分子組裝與軟物質(zhì)材料[C];2014年

10 李永文;夏和生;;雙重響應(yīng)聚合物膠束制備及高強(qiáng)度聚焦超聲控制釋放行為[A];2009年全國高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集（下冊）[C];2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 劉靜;超順磁性Fe_3O_4磁性聚合物載藥膠束的制備與磁靶向載藥體系性能研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 王蓓蕾;葡萄糖響應(yīng)性嵌段共聚物膠束及對胰島素的控制釋放[D];南開大學(xué);2010年

3 張璐;倍他環(huán)糊精修飾的載阿霉素聚合物膠的構(gòu)建及抗腫瘤作用研究[D];浙江大學(xué);2015年

4 何月英;羰基官能團(tuán)化聚己內(nèi)酯共聚物合成、表征及其體外釋藥行為研究[D];華東理工大學(xué);2010年

5 馬穎穎;溫度和pH敏感性可降解高分子膠束載藥體系的研究[D];武漢大學(xué);2013年

6 穆朝峰;多烯紫杉醇聚合物膠束克服腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2010年

7 杜姣姣;基于幾類生物大分子的綠色化學(xué)研究[D];武漢大學(xué);2012年

8 張燕;多功能性納米載藥系統(tǒng)的研究[D];南開大學(xué);2014年

9 王永中;紫杉醇嵌段共聚物膠束給藥系統(tǒng)克服腫瘤多藥耐藥性的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 聶淑瑜;自組裝聚合物膠束藥物遞送系統(tǒng)的耗散粒子動(dòng)力學(xué)模擬[D];華南理工大學(xué);2015年

2 黃淑玲;β-環(huán)糊精兩親性聚合物膠束的制備及活體成像考察[D];廣東藥學(xué)院;2015年

3 楊金龍;淀粉基聚合物膠束的制備及其性能研究[D];蘭州大學(xué);2015年

4 陳名家;還原響應(yīng)型淀粉基聚合物膠束的制備及其作為藥物載體的研究[D];蘭州大學(xué);2016年

5 蔡萌;cRGD肽修飾的還原響應(yīng)性聚合物膠束用于阿霉素的靶向遞送及評價(jià)[D];湖北工業(yè)大學(xué);2016年

6 蘇志會(huì);基于雙載模式的聚合物膠束用于多西他賽的pH敏感遞送[D];山東大學(xué);2016年

7 王秋實(shí);mPEG-S-S-Cys-CLB載藥化合物合成[D];延邊大學(xué);2016年

8 汪家偉;粒徑可控D-甘露糖修飾聚合物膠束的制備及其靶向藥物輸送應(yīng)用[D];江南大學(xué);2016年

9 黃燕;透明質(zhì)酸兩親性聚合物的合成及在抗腫瘤藥物傳遞中的應(yīng)用研究[D];江南大學(xué);2016年

10 王磐;功能化兩親性聚合物膠束及其在藥物控制釋放中的應(yīng)用[D];河南大學(xué);2011年

，

本文編號：781379