本文關(guān)鍵詞：青蒿素衍生物蒿甲醚抗癌機(jī)理的研究

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【摘要】：目的：蒿甲醚(Artemether)為青蒿素的脂溶性衍生物,在臨床上治療惡性瘧和腦型瘧有顯著療效。近年的研究發(fā)現(xiàn),青蒿素及其衍生物有明確的抗腫瘤和抑制腫瘤血管生成的作用。本項(xiàng)研究根據(jù)青蒿素及其衍生物所具有的抗腫瘤和抑制腫瘤血管生成作用,及其能透過血腦屏障進(jìn)入腦組織的藥代動力學(xué)特性,研究蒿甲醚作用于人腦膠質(zhì)瘤體內(nèi)及體外的作用效果,為膠質(zhì)瘤的治療提供一種新的思路和手段。方法：體外培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251,藥物蒿甲醚作用后分為兩組：蒿甲醚組和對照組。四甲基偶氮做鹽(MTT)法分別檢測各組細(xì)胞增殖和抑制情況；使用Trans-well法檢測兩組細(xì)胞的侵襲及遷移能力；使用透射電鏡和流式細(xì)胞儀對兩組細(xì)胞的凋亡情況進(jìn)行定性和定量檢測；通過蛋白質(zhì)印跡法對兩組細(xì)胞中靶基因(Bcl-2,VEGF和MMP-2,MMP-9,MMP-4,APl5及c-MET)蛋白的表達(dá)量進(jìn)行檢測。建立小鼠皮下模型,對小鼠進(jìn)行分組：蒿甲醚組,順鉑組及陰性對照組。采用灌胃給藥法持續(xù)給藥。觀察各組小鼠生存狀態(tài),記錄小鼠體重及腫瘤體積,計(jì)算抑瘤率并繪制曲線,比較各組小鼠的抑瘤情況。腫瘤組織進(jìn)行蘇木精-伊紅染色(HE染色)和免疫組織化學(xué)染色,比較各組小鼠腫瘤生長狀況和血管內(nèi)皮生成在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)狀況。結(jié)果：1,蒿甲醚能夠抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的增殖并且呈劑量和時間的作用關(guān)系(P0.05)。蒿甲醚組及對照組相比,蒿甲醚組細(xì)胞的生長、增殖、遷移及侵襲等能力得到了明顯的抑制,而細(xì)胞的凋亡比率增加,并發(fā)生了細(xì)胞Go/G1期阻滯,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P0.05)。2,小鼠皮下模型建立結(jié)果,蒿甲醚最適劑量組的小鼠狀態(tài)比較良好,高劑量組小鼠狀態(tài)比較低糜,陰性對照組的小鼠表現(xiàn)出不活躍狀態(tài),從腫瘤體積和大小看,高劑量組的和最適劑量組的差別不大,兩組的腫瘤體積和大小都比陰性對照組小,差異顯著(P0.05),但高劑量對小鼠的狀態(tài)有影響。3,HE染色結(jié)果顯示陰性對照組的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞密集成群,呈短梭或不規(guī)則形,向腦組織呈浸潤性生長,其腫瘤細(xì)胞密集程度明顯高于其它各實(shí)驗(yàn)組。從免疫組化染色結(jié)果可見,陰性對照組的血管密度要高于其他實(shí)驗(yàn)組。結(jié)論：蒿甲醚能夠降低靶基因VEGF,MMP-2, MMP-4,MMP-9, c-MET,API5及Bcl-2的表達(dá)和抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移及遷移,參與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制。蒿甲醚能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖,轉(zhuǎn)移的機(jī)制是透過血腦屏障抑制血管的生成,這為蒿甲醚的臨床抗癌藥物開發(fā)提供了依據(jù),也從另一個層面顯示了青蒿素及其衍生物不僅有抗瘧活性,還具有廣譜的抗癌效果。
【關(guān)鍵詞】：蒿甲醚 U251人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 動物模型 靶基因
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 引言11-16
• 1. 青蒿素及其衍生物11-12
• 2. 青蒿素及其衍生物的抗腫瘤作用機(jī)制12-13
• 2.1 青蒿素化合物與鐵的氧化應(yīng)激反應(yīng)12
• 2.2 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和周期阻滯12-13
• 2.3 抗腫瘤新生血管的生成13
• 3. 腦膠質(zhì)瘤13-14
• 4. 腦膠質(zhì)瘤的臨床藥物14
• 5. 本研究的目的及意義14-16
• 第二章 材料和方法16-29
• 1. 材料16-17
• 1.1 細(xì)胞株16
• 1.2 主要試劑16-17
• 2. 方法17-29
• 2.1 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的培養(yǎng)17-18
• 2.1.1 細(xì)胞的復(fù)蘇17
• 2.1.2 細(xì)胞的傳代17
• 2.1.3 細(xì)胞的凍存17-18
• 2.2 細(xì)胞半數(shù)抑制率的計(jì)算18-20
• 2.2.1 細(xì)胞計(jì)數(shù)及種板18
• 2.2.2 細(xì)胞藥物實(shí)驗(yàn)18-19
• 2.2.3 96孔板讀數(shù)19
• 2.2.4 計(jì)算半數(shù)抑制率(IC_(50))19-20
• 2.3 蒿甲醚與膠質(zhì)瘤細(xì)胞中相應(yīng)靶基因的表達(dá)調(diào)控(Western bloting)20-24
• 2.3.1 細(xì)胞藥物處理20
• 2.3.2 單層貼壁細(xì)胞總蛋白提取20-21
• 2.3.4 BCA法蛋白定量21
• 2.3.5 SDS-PAGE凝膠的配制21-22
• 2.3.6 SDS-PAGE電泳22-23
• 2.3.7 轉(zhuǎn)膜(濕轉(zhuǎn)法)23
• 2.3.8 免疫反應(yīng)23
• 2.3.9 化學(xué)發(fā)光、顯影及定影23-24
• 2.4 四甲基偶氮唑鹽法(MTT)檢測U251細(xì)胞的生長及增殖狀況24
• 2.4.1 細(xì)胞種板(96孔板)24
• 2.4.2 細(xì)胞抑制率的計(jì)算24
• 2.5 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)(劃痕實(shí)驗(yàn))24-25
• 2.6 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)(Trans-well試驗(yàn))25
• 2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡25
• 2.8 透射電鏡分析凋亡細(xì)胞形態(tài)25
• 2.9 皮下移植瘤模型建立25-29
• 2.9.1 BALBc裸鼠皮下移植瘤模型建立(預(yù)實(shí)驗(yàn))25-26
• 2.9.2 BALBc裸鼠皮下移植瘤模型建立26
• 2.9.3 裸鼠腦膠質(zhì)瘤腫瘤體積測定及HE染色和免疫組化測定26-29
• 第三章 結(jié)果29-40
• 1. 蒿甲醚藥物實(shí)驗(yàn)29
• 2. 蒿甲醚藥物處理后各組細(xì)胞的生長狀況29-31
• 3. 各組細(xì)胞的增殖情況31
• 4. 各組細(xì)胞遷移能力的比較31-32
• 5. 各組細(xì)胞侵襲能力的比較32-33
• 6. 各組細(xì)胞的凋亡情況33-35
• 7. 各組細(xì)胞靶基因蛋白的表達(dá)情況35-37
• 8. 老鼠皮下模型建立結(jié)果分析37-40
• 8.1 大鼠生存狀態(tài)的觀察37
• 8.2 蒿甲醚預(yù)實(shí)驗(yàn)抑瘤結(jié)果分析37
• 8.3 皮下移植瘤抑瘤結(jié)果分析37-38
• 8.4 HE染色及免疫組化結(jié)果分析38-40
• 第四章 結(jié)論與討論40-45
• 1. 實(shí)驗(yàn)結(jié)論40
• 2. 討論及展望40-45
• 附錄Ⅰ：實(shí)驗(yàn)材料45-48
• 表1 主要試劑用品45-46
• 表2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備46-47
• 表3 實(shí)驗(yàn)耗材47-48
• 附錄Ⅲ：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理48
• 附錄Ⅳ：英文縮寫詞表48-49
• 附錄Ⅴ：綜述49-63
• References58-63
• 參考文獻(xiàn)63-72
• 攻讀碩士學(xué)位期間完成的科研成果72-73
• 致謝73

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1 姚俊敏,蔡s，

本文編號：777016