本文關(guān)鍵詞：枸櫞酸氯米芬抑制大鼠子宮內(nèi)膜增殖及機(jī)制的研究

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【摘要】：研究目的：枸櫞酸氯米芬(克羅米芬,Clomiphene Citrate, CC)是臨床上常用的微刺激方案中促排卵藥物,由于其價(jià)格低廉,使用方便,排卵效果好等優(yōu)點(diǎn),目前仍是微刺激超排方案中的一線藥物。CC可以抑制子宮內(nèi)膜的增殖,降低子宮內(nèi)膜厚度和子宮內(nèi)膜容受性,致使試管嬰兒臨床妊娠率降低、新生兒出生率偏低,但CC影響子宮內(nèi)膜容增殖的分子機(jī)制至今尚未清楚。為了弄清CC如何通過(guò)抑制子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖,以提高低刺激方案的臨床成功率。本研究采用CC對(duì)雌性SD大鼠給藥,然后我們用雌二醇(Estradiol, E2)來(lái)拮抗CC的抗雌激素作用,以期初步探討CC對(duì)子宮內(nèi)膜的影響機(jī)制,以及E2對(duì)CC的抗雌激素作用,緩解子宮內(nèi)膜增殖障礙機(jī)制,為臨床提高患者妊娠率提供相應(yīng)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法：本研究以220-250g體重的雌性SD大鼠為研究對(duì)象,對(duì)大鼠進(jìn)行枸櫞酸氯米芬灌胃給藥,取其子宮內(nèi)細(xì)胞做涂片染色,觀察大鼠自然發(fā)情周期,在發(fā)情前期給藥：枸櫞酸氯米芬(Clomiphene Citrate, CC)、雌二醇(Estradiol, E2),0.9%生理鹽水(Contral, CO),給藥劑量分別為：CC:1mg/kg/body; E2:1 Omg/kg/body, CC組、CO組各5只,分別給藥6天,Western Blot檢測(cè)凋亡相關(guān)的PI3K/AKT、JNK、NF-κB、線粒體信號(hào)通路,以及雌激素受體mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化；CC+E2、CC、CO各組5只,分別給藥10天,給藥結(jié)束后提取子宮內(nèi)膜組織總蛋白,Western Blot再次檢測(cè)凋亡相關(guān)的PI3K/AKT、JNK、NF-κB以及線粒體信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：CC給藥組子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)因子較對(duì)照組明顯降低(P0.05),經(jīng)過(guò)E2協(xié)同給藥,其生長(zhǎng)信號(hào)因子比CC組有所升高(P0.05),但并不能恢復(fù)正常值。CC組JNK、NF-κB信號(hào)通路蛋白表達(dá)較CO組顯著升高,經(jīng)E2協(xié)同給藥后,JNK、NF-κB信號(hào)通路蛋白較CC組沒(méi)有顯著性變化。ESR1、ESR2熒光定量PCR檢測(cè)較CO組沒(méi)有變化,發(fā)現(xiàn)ESR1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)顯著高于ESR2。結(jié)論：1.枸櫞酸氯米芬能夠降低子宮內(nèi)膜厚度,影響子宮內(nèi)膜容受性：2.枸櫞酸氯米芬上調(diào)子宮內(nèi)JNK、NF-κB蛋白磷酸化水平,同時(shí)下調(diào)了生長(zhǎng)信號(hào)相關(guān)蛋白水平；3.CC能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡,抑制子宮內(nèi)膜增生,而E2+CC的協(xié)同給藥能夠緩解此種癥狀。其分子機(jī)制可能和PI3K、JNK、NF-κB等通路相關(guān)；4.CC具有抗雌激素藥物效應(yīng),但并不影響雌激素受體RNA的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：枸櫞酸氯米芬 雌二醇 子宮內(nèi)膜增殖 凋亡通路 生長(zhǎng)信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 英文縮寫詞表11-17
• 本研究中用到的實(shí)驗(yàn)試劑17-21
• 實(shí)驗(yàn)用到的儀器21-22
• 第一章 緒論22-35
• 1.1 體外受精-胚胎移植技術(shù)23-24
• 1.2 枸椽酸氯米芬在輔助生殖領(lǐng)域中的應(yīng)用24-25
• 1.3 子宮內(nèi)膜增殖障礙機(jī)制25-35
• 1.3.1 雌激素受體途徑抑制影響子宮內(nèi)膜增殖25-29
• 1.3.2 線粒體途徑影響子宮內(nèi)膜增殖29-30
• 1.3.3 核轉(zhuǎn)錄因子JNK、NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑30-31
• 1.3.4 生長(zhǎng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑31-35
• 第二章 枸櫞酸氯米芬引起子宮內(nèi)膜增殖障礙制35-43
• 引言35-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)方案36
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料36-40
• 2.2.1 大鼠分組及模型建立36
• 2.2.2 試驗(yàn)主要試劑36-37
• 2.2.3 大鼠給藥37
• 2.2.4 大鼠發(fā)情周期鑒定37-39
• 2.2.5 大鼠子宮內(nèi)膜的HE染色及厚度測(cè)定39-40
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處40
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析40-42
• 2.4.1 大鼠發(fā)情周期鑒定40-41
• 2.4.2 大鼠子宮內(nèi)膜的HE染色及厚度測(cè)定41-42
• 2.5 本章小結(jié)42-43
• 第三章 枸櫞酸氯米芬對(duì)子宮內(nèi)膜增殖的機(jī)制43-59
• 引言43-46
• 3.1 試驗(yàn)方案46
• 3.2 試驗(yàn)材料46-47
• 3.2.1 大鼠分組及模型建立47
• 3.2.2 主要試驗(yàn)試劑47
• 3.3 試驗(yàn)方法47-53
• 3.3.1 大鼠給藥47
• 3.3.2 子宮獲取47
• 3.3.3 線粒體蛋白分離47-48
• 3.3.4 Western blotting檢測(cè)凋亡相關(guān)通路48-49
• 3.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)49-53
• 3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法53
• 3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析53-57
• 3.5.1 Western blot結(jié)果分析53-56
• 3.5.2 RNA提取56
• 3.5.3 瓊脂糖凝膠電泳56-57
• 3.5.4 RT-PCR檢測(cè)57
• 3.6 本章小結(jié)57
• 3.7 討論57-59
• 第四章 雌二醇緩解枸櫞酸氯米芬抑制子宮內(nèi)膜增殖及機(jī)制59-70
• 前言59-61
• 4.1 實(shí)驗(yàn)方案61
• 4.2 試驗(yàn)材料61-64
• 4.2.1 大鼠分組及模型建立61
• 4.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑61
• 4.2.3 大鼠給藥61-62
• 4.2.4 大鼠發(fā)情周期鑒定62-64
• 4.2.5 Western blotting檢測(cè)凋亡相關(guān)通路64
• 4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理64-65
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析65-68
• 4.4.1 大鼠發(fā)情周期鑒定65
• 4.4.2 Western blot結(jié)果分析65-68
• 4.5 本章小結(jié)68
• 4.6 討論68-70
• 第五章 總結(jié)與討論70-75
• 致謝75-76
• 參考文獻(xiàn)76-84
• 附錄A84

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 黃曉燕;宮頸粘液的分泌和精子-宮頸粘液相互作用與克羅米芬關(guān)系研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(計(jì)劃生育分冊(cè));1997年01期

2 張敖;;枸櫞酸氯米芬膠囊與來(lái)曲唑在多囊卵巢綜合征患者促排卵治療中的對(duì)比研究[J];實(shí)用藥物與臨床;2012年12期

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本文編號(hào)：764787