本文關(guān)鍵詞：蚊miR-278-3p與抗藥性關(guān)系的研究

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【摘要】：蚊媒病是一類危害人類健康的重要傳染病,包括瘧疾、登革熱、西尼羅河熱、絲蟲病、日本腦炎等�；瘜W(xué)防治因其長效、方便等特性,始終是蚊媒控制策略中的重要手段。但隨著殺蟲劑的大規(guī)模使用,蚊抗藥性也隨之產(chǎn)生并不斷發(fā)展,進(jìn)一步加劇蚊媒病傳播的態(tài)勢。WHO預(yù)言,抗藥性將成為蚊媒病防治中的一大障礙。因此,蚊媒抗藥性的機(jī)制研究及新的抗藥性基因的發(fā)現(xiàn)仍是蚊媒病防治的重點(diǎn)。代謝抗性是蚊媒抗藥性的主要機(jī)制。長期以來,代謝抗性主要關(guān)注殺蟲劑代謝相關(guān)酶類表達(dá)水平的變化。miRNA是一類重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子,通過與mRNA結(jié)合調(diào)節(jié)體內(nèi)基因的表達(dá)水平。目前,基因轉(zhuǎn)錄后的miRNA調(diào)控機(jī)制集中于昆蟲miRNA測序及感染免疫等方面;抗藥性相關(guān)miRNA的研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室前期采取solexa測序法發(fā)現(xiàn)miR-278-3p在淡色庫蚊溴氰菊酯抗性品系中低表達(dá)。在此基礎(chǔ)上,本研究首先預(yù)測其靶基因,通過qPCR檢測其表達(dá)水平,并通過雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)一步驗(yàn)證miR-278-3p與CYP6AG11的調(diào)控關(guān)系;然后,通過轉(zhuǎn)染后高表達(dá)、干涉后低表達(dá)等方法,研究CYP6AG11對蚊細(xì)胞及蚊溴氰菊酯敏感性的影響;最后,通過基因注射miR-278-3p到成蚊體內(nèi),研究miR-278-3p對蚊溴氰菊酯敏感性的影響,同時(shí)通過qPCR檢測CYP6AG11的表達(dá)水平。主要研究結(jié)果如下:1.靶標(biāo)預(yù)測提示,miR-278-3p的種子序列可與CYP6AG11的3’UTR序列完全互補(bǔ)配對;qPCR結(jié)果顯示,miR-278-3p在淡色庫蚊敏感品系高表達(dá),而CYP6AG11在抗性品系高表達(dá),提示miR-278-3p可能調(diào)節(jié)CYP6AG11的表達(dá)。雙熒光素酶報(bào)告檢測顯示,加入miR-278-3p mimic組可使熒光讀值降低,進(jìn)一步證實(shí)miR-278-3p可在細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)CYP6AG11的表達(dá)。2.構(gòu)建淡色庫蚊CYP6AG11表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染入C6/36細(xì)胞,CCK8檢測顯示,經(jīng)不同濃度溴氰菊酯處理后,CYP6AG11轉(zhuǎn)染組的存活率高于對照組,即高表達(dá)CYP6AG11后蚊細(xì)胞對溴氰菊酯敏感性降低。同時(shí),將干擾RNA(siRNA)注射入成蚊體內(nèi)后,CDC bottle檢測結(jié)果顯示,干擾組的死亡率高于對照組,即干擾CYP6AG11的表達(dá)后蚊對溴氰菊酯敏感性提高。表明CYP6AG11參與溴氰菊酯抗性的形成,是一個(gè)新的抗藥性相關(guān)基因。3.將miR-278-3p mimic注射入成蚊體內(nèi),qPCR檢測顯示,mimic組CYP6AG11的表達(dá)明顯低于對照組,提示miR-278-3p可以在成蚊體內(nèi)調(diào)節(jié)CYP6AG11的表達(dá);CDC bottle檢測結(jié)果顯示,接觸溴氰菊酯后,miR-278-3p mimic注射組的死亡率高于對照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證,miR-278-3p可通過調(diào)節(jié)CYP6AG11參與抗藥性的形成。4.qPCR檢測不同現(xiàn)場敏感及抗性品系中CYP6AG11與miR-278-3p的表達(dá)差異,結(jié)果顯示,miR-278-3p在平陰及商河現(xiàn)場敏感品系中呈高表達(dá),差異倍數(shù)分別為1.7和2.1;CYP6AG11在平陰及商河現(xiàn)場抗性品系中呈高表達(dá),差異倍數(shù)分別為21.3和2.0,但是其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),需擴(kuò)大現(xiàn)場樣本量進(jìn)一步檢測。本研究報(bào)告了淡色庫蚊miR-278-3p通過調(diào)節(jié)CYP6AG11的表達(dá),參與抗藥性的形成,研究結(jié)果為闡明抗藥性分子機(jī)制提供了新的科學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：淡色庫蚊 溴氰菊酯 抗藥性 miR-278-3p CYP6AG11
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 材料和方法12-41
• 一、實(shí)驗(yàn)材料12-15
• （一）供試蚊12
• （二）細(xì)胞系12
• （三）主要試劑12-13
• （四）主要溶液配方13-14
• （五）主要儀器14-15
• 二、實(shí)驗(yàn)方法15-41
• （一）淡色庫蚊mi R2783p與CYP6AG11的關(guān)系15-29
• （二）淡色庫蚊CYP6AG11與抗藥性的關(guān)系29-39
• （三）蚊mi R2783p、CYP6AG11與抗藥性的關(guān)系39-40
• （四）蚊現(xiàn)場品系中mi R2783p與CYP6AG11的表達(dá)水平40-41
• 結(jié)果41-54
• 一、淡色庫蚊mi R2783p與CYP6AG11的關(guān)系41-47
• 二、淡色庫蚊CYP6AG11與抗藥性的關(guān)系47-51
• 三、蚊mi R2783p、CYP6AG11與抗藥性的關(guān)系51-52
• 四、蚊現(xiàn)場品系中mi R2783p與CYP6AG11的表達(dá)水平52-54
• 討論54-59
• 小結(jié)59-60
• 參考文獻(xiàn)60-69
• 綜述69-82
• 參考文獻(xiàn)75-82
• 已發(fā)表文章82-83
• 致謝83

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 雷震濤;蚊miR-278-3p與抗藥性關(guān)系的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：740212