本文關(guān)鍵詞：TRP通道調(diào)節(jié)膽囊平滑肌收縮作用與其小分子調(diào)節(jié)劑篩選研究

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【摘要】：TRPC4離子通道小分子調(diào)節(jié)劑的篩選目的瞬時感受器電位C離子通道(Transient Receptor Potential Canonical,TRPC channels)是一類可調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣濃度的非特異性陽離子通道,在體內(nèi)分布廣泛,參與多種不同生理功能,包括對神經(jīng)、心血管、消化、呼吸、內(nèi)分泌和泌尿系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。目前,針對TRPC特異性的小分子化合物較少,且特異性差。本研究中,旨在發(fā)現(xiàn)特異性好的TRPC4通道小分子調(diào)節(jié)劑,這對于研究TRPC4通道的生理功能,調(diào)節(jié)機理,以及臨床應(yīng)用都將起到很大的促進作用。方法1.化學(xué)合成:基于先導(dǎo)化合物ML401的母核結(jié)構(gòu),設(shè)計并化學(xué)合成了一系列1-H-苯并咪唑-2-胺類衍生物。2.PCR及突變制備TRPC4的突變體。3.鈣成像檢測:在細胞水平對這些化合物進行高通量篩選。4.膜片鉗記錄:某些對TRPC4具有較好的抑制活性的化合物以全細胞記錄的方式進行進一步鑒別。結(jié)果1.設(shè)計合成了30個1-H-苯并咪唑 2-胺類化合物。2.制備出TRPC4的突變體(TRPC4 G503L)。3.化合物21活性(IC50=0.65μM)顯著優(yōu)于陽性化合物ML401(IC50=1.05μM)。4.化合物G1224對配體激活TRPC4通道有明顯的增強作用(EC50=0.78μM)。結(jié)論發(fā)現(xiàn)一系列對TRPC4有良好抑制效應(yīng)的化合物,尤其是化合物G1224對配體激活TRPC4通道有顯著的增強作用。TRPP2通道調(diào)節(jié)膽囊平滑肌收縮作用目的TRPP2屬于瞬時受體電位(transient receptorpotential,TRP)通道超家族的成員之一,廣泛分布于多種組織中,包括消化道的平滑肌。大量的證據(jù)表明TRPP2通道能夠調(diào)控細胞內(nèi)鈣庫的釋放。然而,TRPP2在膽囊平滑肌收縮中的作用仍不清晰。在本研究中,我們探討了TRPP2在豚鼠膽囊平滑肌收縮中的調(diào)節(jié)作用及其機制。方法1.膽囊平滑肌條的制備:CO2窒息法將豚鼠窒息處死,立即取出膽囊。去除脂肪和漿膜層后,將膽囊沿縱軸切成一個1.0×0.3厘米的肌條。每條平滑肌條放入已經(jīng)飽和有混合氧氣(95%O2和5%CO2)的Krebs液的組織浴槽中。2.膽囊平滑肌條張力檢測:使用數(shù)據(jù)采集和分析系統(tǒng)(BL-420S)來記錄和分析收縮張力功能。用不同的激動劑去檢測膽囊收縮功能的變化。3.膽囊平滑肌鈣離子成像實驗:將TRPP2 si RNA轉(zhuǎn)染到膽囊平滑肌中,利用Leica SP5激光共聚焦顯微鏡系統(tǒng)檢測激動劑誘導(dǎo)的細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。4.膽囊平滑肌Western blot實驗:使用anti-TRPP2檢測豚鼠膽囊平滑肌中TRPP2的蛋白表達水平。結(jié)果1.通過TRPP2特異性的si RNA轉(zhuǎn)染,可以使豚鼠膽囊平滑肌內(nèi)TRPP2蛋白表達被抑制,同時顯著減小了膽囊平滑肌中Ca2+的釋放和Ca2+內(nèi)流,同樣也抑制了激動劑引起的膽囊平滑肌收縮。2.U73122、2APB和TG可以顯著抑制由卡巴膽堿引起的膽囊平滑肌收縮,消除了在TRPP2敲除組和scramble si RNA對照組中卡巴膽堿誘導(dǎo)膽囊平滑肌肌條收縮的不同。結(jié)論TRPP2通道介導(dǎo)了膽囊平滑肌細胞內(nèi)鈣庫中Ca2+釋放,并在激動劑誘導(dǎo)的膽囊平滑肌收縮中起著十分重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：TRPC 離子通道 1-H-苯并咪唑-2-胺類衍生物 合成 抑制活性 TRP通道 TRPP2 收縮 膽囊平滑肌 鈣庫 三磷酸肌醇受體
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• TRPC4離子通道小分子調(diào)節(jié)劑的篩選7-28
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-12
• 2 材料與方法12-17
• 3 結(jié)果17-26
• 4 討論26-27
• 5 結(jié)論27-28
• TRPP2通道調(diào)節(jié)膽囊平滑肌收縮作用28-45
• 摘要28-30
• Abstract30-32
• 1 前言32-33
• 2 材料與方法33-37
• 3 結(jié)果37-42
• 4 討論42-44
• 5 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-50
• 簡歷50-51
• 致謝51-52
• 瞬時感受器電位C4離子通道及其小分子調(diào)節(jié)劑52-64
• 參考文獻60-64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 FU Jie;GAO ZhaoBing;SHEN Bing;ZHU Michael X.;;Canonical transient receptor potential 4 and its small molecule modulators[J];Science China(Life Sciences);2015年01期

2 張宗明;;膽道外科疾病的診治現(xiàn)狀與進展[J];世界華人消化雜志;2008年11期

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本文編號：617704