發(fā)布時(shí)間：2017-07-05 12:17

  本文關(guān)鍵詞：絲氨酸蛋白酶Omi切割E2F1調(diào)控神經(jīng)突起生長(zhǎng)

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【摘要】：目的:Omi是一種可以行使多種細(xì)胞功能的蛋白酶。Omi蛋白酶活性缺失突變會(huì)誘發(fā)帕金森病的發(fā)生。本課題目的旨在發(fā)現(xiàn)Omi的底物蛋白,探索Omi對(duì)神經(jīng)元分化的調(diào)控作用。方法:應(yīng)用GST pulldown實(shí)驗(yàn)和體外蛋白切割實(shí)驗(yàn)來(lái)明確Omi的底物蛋白。通過(guò)蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平。通過(guò)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、si RNA、sh RNA,對(duì)目的蛋白的功能進(jìn)行研究。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction)技術(shù)來(lái)檢測(cè)m RNA水平。在小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(N2a細(xì)胞)中使用20μM視黃酸(RA)誘導(dǎo)分化;對(duì)分化的的N2a細(xì)胞,給予Omi蛋白酶活性抑制劑UCF101或者轉(zhuǎn)染sh RNA沉默Omi的表達(dá),檢測(cè)細(xì)胞突起長(zhǎng)度,驗(yàn)證Omi對(duì)神經(jīng)細(xì)胞分化影響;使用Image J軟件計(jì)算細(xì)胞突起長(zhǎng)度。結(jié)果:我們?cè)贠mi蛋白酶活性缺失鼠mnd2鼠和Omi基因沉默細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)E2F1的表達(dá)水平明顯上調(diào);但在mnd2鼠中E2F1的m RNA表達(dá)水平?jīng)]有變化。不同細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染野生型Omi質(zhì)粒后發(fā)現(xiàn)E2F1的表達(dá)水平有所下調(diào),但轉(zhuǎn)染絲氨酸蛋白酶活性缺陷突變體S276C Omi質(zhì)粒后E2F1的表達(dá)水平?jīng)]有變化。我們?cè)谑竽X組織中發(fā)現(xiàn)E2F1與Omi相結(jié)合。在視黃酸誘導(dǎo)分化的N2a細(xì)胞中,沉默Omi的表達(dá)或者給予Omi蛋白酶抑制劑UCF101可以抑制神經(jīng)突起生長(zhǎng),并且都伴隨著E2F1表達(dá)量的增加。結(jié)論:E2F1是Omi的底物蛋白。Omi通過(guò)切割降解E2F1來(lái)調(diào)控神經(jīng)元的分化。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)元分化 Omi E2F1 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)障礙2型鼠mnd2鼠
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-10
• 材料與方法10-24
• 1 實(shí)驗(yàn)材料10-13
• 2 實(shí)驗(yàn)方法13-23
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法23-24
• 結(jié)果24-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 綜述：轉(zhuǎn)錄因子E2F1 與神經(jīng)退行性疾病45-53
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 英文縮寫(xiě)詞表53-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文54-55
• 致謝55-56

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本文編號(hào)：521938