本文關(guān)鍵詞：絲氨酸蛋白酶Omi切割E2F1調(diào)控神經(jīng)突起生長

  更多相關(guān)文章： 神經(jīng)元分化 Omi E2F1 運動神經(jīng)障礙2型鼠mnd2鼠

【摘要】：目的:Omi是一種可以行使多種細胞功能的蛋白酶。Omi蛋白酶活性缺失突變會誘發(fā)帕金森病的發(fā)生。本課題目的旨在發(fā)現(xiàn)Omi的底物蛋白,探索Omi對神經(jīng)元分化的調(diào)控作用。方法:應用GST pulldown實驗和體外蛋白切割實驗來明確Omi的底物蛋白。通過蛋白免疫印跡實驗來檢測蛋白的表達水平。通過轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、si RNA、sh RNA,對目的蛋白的功能進行研究。應用實時熒光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction)技術(shù)來檢測m RNA水平。在小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞系(N2a細胞)中使用20μM視黃酸(RA)誘導分化;對分化的的N2a細胞,給予Omi蛋白酶活性抑制劑UCF101或者轉(zhuǎn)染sh RNA沉默Omi的表達,檢測細胞突起長度,驗證Omi對神經(jīng)細胞分化影響;使用Image J軟件計算細胞突起長度。結(jié)果:我們在Omi蛋白酶活性缺失鼠mnd2鼠和Omi基因沉默細胞系中發(fā)現(xiàn)E2F1的表達水平明顯上調(diào);但在mnd2鼠中E2F1的m RNA表達水平?jīng)]有變化。不同細胞系中轉(zhuǎn)染野生型Omi質(zhì)粒后發(fā)現(xiàn)E2F1的表達水平有所下調(diào),但轉(zhuǎn)染絲氨酸蛋白酶活性缺陷突變體S276C Omi質(zhì)粒后E2F1的表達水平?jīng)]有變化。我們在鼠腦組織中發(fā)現(xiàn)E2F1與Omi相結(jié)合。在視黃酸誘導分化的N2a細胞中,沉默Omi的表達或者給予Omi蛋白酶抑制劑UCF101可以抑制神經(jīng)突起生長,并且都伴隨著E2F1表達量的增加。結(jié)論:E2F1是Omi的底物蛋白。Omi通過切割降解E2F1來調(diào)控神經(jīng)元的分化。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)元分化 Omi E2F1 運動神經(jīng)障礙2型鼠mnd2鼠
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-10
• 材料與方法10-24
• 1 實驗材料10-13
• 2 實驗方法13-23
• 3.統(tǒng)計學方法23-24
• 結(jié)果24-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-45
• 綜述：轉(zhuǎn)錄因子E2F1 與神經(jīng)退行性疾病45-53
• 參考文獻48-53
• 英文縮寫詞表53-54
• 攻讀學位期間發(fā)表論文54-55
• 致謝55-56

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本文編號：521938