發(fā)布時間：2017-06-30 15:20

  本文關(guān)鍵詞：不同特性納米系統(tǒng)應用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外攝取與轉(zhuǎn)運機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：感音神經(jīng)性聾與耳鳴、眩暈被認為是耳科學三大難治性疾病,且發(fā)病率呈增加趨勢,嚴重影響著患者的生活質(zhì)量。通過內(nèi)耳局部給藥對于內(nèi)耳疾病的治療較傳統(tǒng)的全身給藥具有顯著優(yōu)勢,但在內(nèi)耳局部給藥中,藥物傳遞系統(tǒng)的粒徑、表面化學等性質(zhì)影響著內(nèi)耳藥物分布,而且遞藥系統(tǒng)也可能引起耳蝸病變。本文通過對不同特性的納米載藥系統(tǒng)體內(nèi)外生物相容性與攝取轉(zhuǎn)運機制的研究,系統(tǒng)地比較了不同特性的納米載藥系統(tǒng)在內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外行為,期望能為納米載藥系統(tǒng)在內(nèi)耳疾病治療中的應用提供參考與借鑒。以乳酸-羥基乙酸共聚物納米粒(PLGA NPs)為模型,研究了不同粒徑的納米載藥系統(tǒng)應用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外攝取與分布行為。體外細胞毒性和攝取實驗研究結(jié)果表明,粒徑分別為100 nm、100~200 nm和200~400 nm的PLGA NPs,對L929均無明顯細胞毒性,且都能被細胞攝取,分布于細胞核周圍;對其進行定量分析發(fā)現(xiàn)中間粒徑的攝取量最大,其次是小粒徑,再次是大粒徑,其細胞攝取率依次為99.5%、97.6%、71.9%。體內(nèi)組織相容性和分布實驗結(jié)果顯示,不同粒徑的PLGA NPs均表現(xiàn)出較好的生物相容性,且能轉(zhuǎn)運至內(nèi)耳并分布到耳蝸各個組織中,其中中間粒徑的納米粒分布量最大。對中間粒徑的PLGA NPs進行不同的表面修飾,制備得到泊洛薩姆407修飾的PLGA NPs(P407-PLGA NPs)、殼聚糖修飾的PLGA NPs(CS-PLGA NPs)和單氧基聚乙二醇修飾的PLGA NPs(mPEG-PLGA NPs),并對未經(jīng)修飾的和表面修飾的PLGA NPs應用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外攝取與分布規(guī)律進行了系統(tǒng)地比較。研究發(fā)現(xiàn),未經(jīng)修飾的和不同表面修飾的PLGA NPs對L929細胞和HEI-OC1細胞均表現(xiàn)出良好的生物相容性,且都能被兩種細胞攝取,其中P407-PLGA NPs較其他納米粒在兩種細胞中均有最大攝取率(L929:96.1%;HEI-OC1:91.4%)。體內(nèi)實驗也證明未經(jīng)修飾的和不同表面修飾的PLGA NPs均具有良好的生物相容性,經(jīng)局部給藥過后均能轉(zhuǎn)運進入耳蝸;且經(jīng)表面修飾的比未經(jīng)修飾的PLGA NPs分布量更大,其中P407-PLGA NPs分布量最高。在耳蝸各組織分布結(jié)果表明,未經(jīng)修飾的和表面修飾的PLGA NPs均能轉(zhuǎn)運分布至耳蝸各個組織,并且經(jīng)表面修飾的PLGA NPs均能進入到內(nèi)耳外毛細胞中,尤其是P407-PLGA NPs,熒光半定量分析結(jié)果表明其在內(nèi)耳外毛細胞中分布量分別為未經(jīng)修飾的和經(jīng)CS、mPEG修飾的PLGA NPs的1.95、1.76、1.39倍(P0.001)。以殼聚糖納米粒(CS NPs)為模型,研究了不同金屬離子配合CS NPs應用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外毒性與攝取分布規(guī)律,分別為未經(jīng)金屬離子配合的CS NPs、銅離子配合的CS NPs(Cu-CS NPs)、鈣離子配合的CS NPs(Ca-CS NPs)、鋅離子配合的CS NPs(Zn-CS NPs)和鐵離子配合的CS NPs(Fe-CS NPs)。體外細胞毒性實驗結(jié)果表明,未經(jīng)修飾的和金屬離子配合的CS NPs在低濃度中(㩳50μg/mL)均表現(xiàn)出良好的生物相容性,隨著濃度加大,毒性增加。體外細胞攝取實驗結(jié)果顯示,對于L929細胞,未經(jīng)修飾的和金屬離子配合的CS NPs(除Fe-CS NPs)均有較大攝取量,攝取率達90%以上;對于HEI-OC1細胞,未經(jīng)修飾的和不同金屬離子配合CS NPs均能被其攝取,且未經(jīng)修飾的CS NPs和Zn-CS NPs較其他納米粒均有更高攝取量。體內(nèi)動物實驗結(jié)果表明,未經(jīng)修飾的和金屬離子配合的CS NPs(除Ca-CS NPs)均表現(xiàn)出較好的生物相容性,且均能分布到耳蝸各組織。綜上所述,本研究結(jié)果表明,納米載藥系統(tǒng)的不同特性影響其體內(nèi)外生物相容性和攝取分布行為,通過調(diào)整納米載藥系統(tǒng)的特性,有利于獲得更優(yōu)的載藥系統(tǒng)。對于PLGA納米系統(tǒng)應用于內(nèi)耳給藥,調(diào)整粒徑范圍在100~200 nm更有利于其細胞攝取,并且,通過對其表面修飾,尤其是親水性分子P407進行修飾,能顯著提高其在體內(nèi)外的攝取與分布。對于CS納米系統(tǒng)應用于內(nèi)耳給藥,通過不同金屬離子配合將影響其生物相容性及其攝取分布行為,為其處方設計優(yōu)化提供參考與借鑒。
【關(guān)鍵詞】：納米系統(tǒng) 內(nèi)耳給藥 PLGA納米粒 殼聚糖納米粒 細胞攝取 耳蝸分布
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R943
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一章 前言12-23
• 1 納米遞藥系統(tǒng)及其在內(nèi)耳給藥中的應用12-14
• 1.1 內(nèi)耳疾病的治療現(xiàn)狀12
• 1.2 納米遞藥系統(tǒng)及其應用于內(nèi)耳的研究現(xiàn)狀12-14
• 2 納米遞藥系統(tǒng)的特性對其細胞毒性、攝取及轉(zhuǎn)運的影響14-19
• 2.1 粒徑和形態(tài)14-15
• 2.2 表面功能化修飾15-19
• 3 納米遞藥系統(tǒng)的特性對其體內(nèi)分布、轉(zhuǎn)運的影響19-21
• 3.1 粒徑和形態(tài)19
• 3.2 表面功能化修飾19-21
• 4 本課題的研究內(nèi)容和意義21-23
• 第二章 不同粒徑的PLGA NPs應用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外攝取與轉(zhuǎn)運機制研究23-36
• 1 材料23-24
• 1.1 儀器23
• 1.2 試劑23
• 1.3 細胞系與動物23-24
• 2 方法24-28
• 2.1 溶液的配制24
• 2.2 不同粒徑PLGA NPs的制備24-25
• 2.3 不同粒徑PLGA NPs的體外細胞實驗25-26
• 2.4 不同粒徑PLGA NPs的體內(nèi)動物實驗26-27
• 2.5 數(shù)據(jù)分析27-28
• 3 結(jié)果28-35
• 3.1 不同粒徑PLGA NPs的細胞毒性28
• 3.2 共聚焦顯微鏡觀察不同粒徑PLGA NPs的細胞攝取及其胞內(nèi)分布28-30
• 3.3 流式細胞術(shù)檢測不同粒徑PLGA NPs的細胞攝取30-31
• 3.4 不同粒徑PLGA NPs局部給藥后內(nèi)耳組織相容性31-32
• 3.5 不同粒徑PLGA NPs局部給藥后耳蝸中分布32-35
• 4 討論35-36
• 4.1 體外細胞毒性的測定35
• 4.2 納米系統(tǒng)的粒徑對其體內(nèi)外攝取轉(zhuǎn)運的影響35-36
• 第三章 不同表面修飾的PLGA NPs應用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外攝取與轉(zhuǎn)運機制研究36-53
• 1 材料36-37
• 1.1 儀器36
• 1.2 試劑36
• 1.3 細胞系與動物36-37
• 2 方法37-41
• 2.1 溶液的配制37
• 2.2 不同表面修飾PLGA NPs的制備37
• 2.3 不同表面修飾PLGA NPs的體外細胞實驗37-39
• 2.4 不同表面修飾PLGA NPs的體內(nèi)動物實驗39-41
• 2.5 數(shù)據(jù)分析41
• 3 結(jié)果41-51
• 3.1 不同表面修飾PLGA NPs的細胞毒性41-43
• 3.2 共聚焦顯微鏡觀察不同表面修飾PLGA NPs的細胞攝取及其胞內(nèi)分布43-45
• 3.3 流式細胞術(shù)檢測不同表面修飾PLGA NPs的細胞攝取45-47
• 3.4 不同表面修飾PLGA NPs局部給藥后內(nèi)耳組織相容性47-48
• 3.5 不同表面修飾PLGA NPs局部給藥后耳蝸中分布48-50
• 3.6 不同表面修飾PLGA NPs局部給藥后耳蝸毛細胞中分布50-51
• 4 討論51-53
• 4.1 耳蝸毛細胞株的選擇51-52
• 4.2 納米系統(tǒng)的表面修飾對其體內(nèi)外攝取轉(zhuǎn)運影響機制探討52-53
• 第四章 不同金屬離子配合CS NPs應用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外攝取與轉(zhuǎn)運機制研究53-66
• 1 材料53-54
• 1.1 儀器53
• 1.2 試劑53-54
• 1.3 細胞系與動物54
• 2 方法54-57
• 2.1 溶液的配制54
• 2.2 不同金屬離子配合CS NPs的制備54
• 2.3 不同金屬離子配合CS NPs的體外細胞實驗54-56
• 2.4 不同金屬離子配合CS NPs的體內(nèi)動物實驗56-57
• 2.5 數(shù)據(jù)分析57
• 3 結(jié)果57-65
• 3.1 不同金屬離子配合CS NPs的細胞毒性57-58
• 3.2 共聚焦顯微鏡觀察不同金屬離子配合CS NPs的細胞攝取及其胞內(nèi)分布58-60
• 3.3 流式細胞術(shù)檢測不同金屬離子配合CS NPs的細胞攝取結(jié)果60-62
• 3.4 不同金屬離子配合CS NPs局部給藥后內(nèi)耳組織相容性62-64
• 3.5 不同金屬離子配合CS NPs局部給藥后耳蝸中分布64-65
• 4 討論65-66
• 4.1 不同金屬離子配合CS NPs體內(nèi)外毒性機制探討65
• 4.2 不同金屬離子配合CS NPs細胞攝取分析比較65-66
• 第五章 全文總結(jié)66-68
• 參考文獻68-75
• 英文縮寫注釋75-76
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文76-77
• 致謝77

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