本文關(guān)鍵詞：新型微管靶向抑制劑LL-01和LL-02抗腫瘤活性與機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景在全球范圍內(nèi),由于其高發(fā)性和高致死性,癌癥已成為一個巨大的社會負(fù)擔(dān)。除手術(shù)、放療外,化療仍然是腫瘤治療的主要手段。微管是細(xì)胞骨架的主要組成成分,在真核細(xì)胞中必不可少。微管參與多種細(xì)胞過程,如維持細(xì)胞形態(tài)、參與細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運、參與細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂等。由于其在細(xì)胞,尤其是細(xì)胞分裂中的重要作用,微管常作為抗腫瘤藥物研究的靶點。根據(jù)與微管作用位點的不同,微管靶向抑制劑主要分為作用于紫杉醇位點、長春堿位點和秋水仙堿位點的微管靶向抑制劑。盡管紫杉醇類和長春堿類微管靶向抑制劑廣泛用于臨床腫瘤治療,但是這類藥物經(jīng)常伴隨過敏性反應(yīng)、骨髓抑制、周圍神經(jīng)病變等副作用以及腫瘤的多藥耐藥現(xiàn)象。因此,新型小分子秋水仙堿類微管靶向抑制劑成為人們研究的熱點。LL-01和ILL-02是通過計算機輔助藥物設(shè)計合成的靶向微管秋水仙堿位點的化合物。本課題主要研究LL-01和LL-02抗腫瘤活性及作用機制。第一部分LL-01抗非小細(xì)胞肺癌活性與機制研究實驗方法：采用MTT法、克隆形成實驗、臺盼藍(lán)染色實驗及裸鼠移植瘤實驗來評價LL-01對非小細(xì)胞肺癌的增殖抑制作用。體外微管聚合實驗及免疫熒光染色實驗檢測LL-01對微管聚合的影響。PI單染法檢測LL-01對A549細(xì)胞周期分布的影響。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和Annexin V-FITC/PI雙染法檢測LL-01對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。Western blotting法檢測LL-01對A549細(xì)胞中cyclin B1、p-cdc2、cleaved caspase-3和cleaved PARP表達(dá)水平的影響。小管形成實驗檢測LL-01對血管形成的影響。實驗結(jié)果：LL-01可顯著抑制非小細(xì)胞肺癌體內(nèi)外增殖,且無明顯毒性。LL-01體外能夠抑制微管蛋白聚合,并可破壞A549細(xì)胞微管結(jié)構(gòu)。LL-01可誘導(dǎo)A549細(xì)胞G2/M期阻滯,并能調(diào)節(jié)G2/M期相關(guān)蛋白cyclin B1和p-cdc2的表達(dá)。LL-01可誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡,并能提高cleaved caspase-3和cleaved PARP的表達(dá)水平。此外,LL-01能有效抑制小管形成,并呈現(xiàn)濃度依賴性。實驗結(jié)論：新型微管靶向抑制劑LL-01能有效抑制非小細(xì)胞肺癌體內(nèi)外增殖,其作用機制與靶向微管破壞微管動力學(xué)從而誘導(dǎo)細(xì)胞G2/M期阻滯及凋亡有關(guān)。此外,LL-01還具有良好的抗血管生成活性。因此,LL-01有潛力成為抗非小細(xì)胞肺癌的候選藥物。第二部分LL-02抗白血病活性與機制研究實驗方法：MTT法評價LL-02對一系列腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用,并選取白血病細(xì)胞K562進行后續(xù)研究。體外微管聚合實驗及體內(nèi)微管聚合實驗檢測LL-02對微管聚合的影響。PI單染法檢測LL-02對K562細(xì)胞周期分布的影響。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和Annexin V-FITC/PI雙染法檢測LL-02對K562細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。小管形成實驗檢測LL-02對血管形成的影響。實驗結(jié)果：LL-02對一系列腫瘤細(xì)胞均有抑制作用,半數(shù)抑制率在19-102 nmol/L之間,并以時間劑量依賴性方式抑制白血病細(xì)胞K562和CCRF-CEM的增殖。LL-02在體外和K562細(xì)胞內(nèi)均可抑制微管蛋白聚合。LL-02可誘導(dǎo)K562細(xì)胞G2/M期阻滯和凋亡。此外,LL-02能有效抑制小管形成,并呈現(xiàn)濃度依賴性。實驗結(jié)論：新型微管靶向抑制劑LL-02抗瘤譜廣,并能有效抑制白血病細(xì)胞增殖,其機制可能是靶向微管破壞微管動力學(xué)從而誘導(dǎo)細(xì)胞G2/M期阻滯及凋亡。此外,LL-02還具有良好的抗血管生成活性。因此,LL-02有潛力成為抗白血病的候選藥物。
【關(guān)鍵詞】：微管靶向抑制劑 抗增殖活性 G2/M期阻滯 凋亡 抗血管生成
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-15
• 符號說明15-17
• 前言17-26
• 1 微管17-21
• 1.1 微管的結(jié)構(gòu)17-19
• 1.2 微管的動力學(xué)特性19-20
• 1.3 微管在細(xì)胞內(nèi)的生理功能20-21
• 2 微管靶向抑制劑21-24
• 2.1 微管靶向抑制劑的抗腫瘤機制22
• 2.2 微管靶向抑制劑的分類22-24
• 3 本課題研究內(nèi)容24-26
• 第一部分 LL-01抗非小細(xì)胞肺癌活性與機制研究26-48
• 1 實驗材料26-28
• 1.1 化合物26
• 1.2 細(xì)胞株26
• 1.3 實驗動物及人非小細(xì)胞肺癌組織26
• 1.4 試劑26-28
• 1.5 儀器設(shè)備28
• 2 實驗方法28-35
• 2.1 腫瘤細(xì)胞生長抑制實驗28-30
• 2.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察30
• 2.3 體外微管聚合實驗30-31
• 2.4 免疫熒光染色實驗31
• 2.5 細(xì)胞周期檢測31-32
• 2.6 Annexin V-FITC/PI染實驗32
• 2.7 Western blotting檢測蛋白表達(dá)32-34
• 2.8 小管形成實驗34-35
• 2.9 體內(nèi)抗腫瘤活性研究(裸鼠移植瘤實驗)35
• 3 實驗結(jié)果35-45
• 3.1 LL-01抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖35-37
• 3.2 LL-01抑制非小細(xì)胞肺癌移植瘤的生長37-38
• 3.3 LL-01抑制微管蛋白聚合38-39
• 3.4 LL-01誘導(dǎo)A549細(xì)胞G2/M期阻滯并調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的表達(dá)39-41
• 3.5 LL-01通過激活caspase-3誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡41-44
• 3.6 LL-01抑制HUVEC細(xì)胞小管生成44-45
• 4 討論與結(jié)論45-48
• 第二部分 LL-02抗白血病活性與機制研究48-57
• 1 實驗材料48
• 1.1 化合物48
• 1.2 細(xì)胞株48
• 1.3 試劑48
• 1.4 儀器設(shè)備48
• 2 實驗方法48-49
• 2.1 MTT法48
• 2.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察48-49
• 2.3 體外微管聚合實驗49
• 2.4 體內(nèi)微管聚合實驗49
• 2.5 細(xì)胞周期檢測49
• 2.6 Annexin V-FITC/PI雙染實驗49
• 2.7 小管形成實驗49
• 3 實驗結(jié)果49-56
• 3.1 LL-02抑制腫瘤細(xì)胞增殖49-51
• 3.2 LL-02抑制微管蛋白聚合51-52
• 3.3 LL-02誘導(dǎo)K562細(xì)胞G2/M期阻滯52-53
• 3.4 LL-02誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡53-55
• 3.5 LL-02抑制HUVEC細(xì)胞小管生成55-56
• 4 討論與結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-66
• 致謝66-67
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表和待發(fā)表的學(xué)術(shù)論文67-68
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表68

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王靜靜;新型微管靶向抑制劑LL-01和LL-02抗腫瘤活性與機制研究[D];山東大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：新型微管靶向抑制劑LL-01和LL-02抗腫瘤活性與機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：499575