目的:通過觀察單純缺氧(1%O2)和缺氧/饑餓兩種環(huán)境下重組人血管內皮抑制素(endostar)及多靶點抗血管生成藥物E109(尚未上市的試驗藥物,因涉及商業(yè)保密、以其臨床試驗的倫理批號后四個字母表示)對人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)形態(tài)、增殖,成管以及遷移能力之作用;觀察缺氧環(huán)境下兩種藥物對內皮細胞標志物蛋白水平的影響,并與前期觀察到的缺氧環(huán)境下單靶點抗血管生成藥貝伐單抗(bevacizumab)對HUVEC的作用結果對比,找出三種代表性抗血管生成藥對人臍靜脈內皮細胞作用的異同之處。方法:選取狀態(tài)良好的對數(shù)期HUVEC進行實驗,使用Billups-rothenber細胞缺氧研究裝置建立缺氧實驗環(huán)境,并在此基礎上以無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞建立缺氧/饑餓環(huán)境。觀察細胞形態(tài)并拍照,通過MTT法檢測環(huán)境及藥物對細胞增殖的影響,并根據(jù)MTT細胞增殖實驗結果,選擇后續(xù)遷移及三維培養(yǎng)成管實驗中處理時間點及藥物濃度。通過Transwell遷移實驗、三維培養(yǎng)成管實驗分別檢測兩種環(huán)境下E109及恩度對HUVEC遷移、成管能力的影響,...

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【學位級別】：碩士

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圖2不同環(huán)境處理后HUVEC的形態(tài)學改變注：NC（NormolControl）代表細胞于正常環(huán)境培養(yǎng)；H（Hypoxia）代表細胞于

結果1實驗環(huán)境及藥物處理引起HUVEC形態(tài)學變化1.1正常、單純缺氧、單純饑餓及缺氧/饑餓環(huán)境對HUVEC細胞形態(tài)的影響使用倒置顯微鏡觀察不同環(huán)境處理后的細胞，與正常培養(yǎng)環(huán)境相比，單氧環(huán)境、單純饑餓環(huán)境及缺氧/饑餓環(huán)境處理24、48小時后，部分HUVE出現(xiàn)梭狀改變，并發(fā)....

圖3缺氧+E109處理后HUVEC的形態(tài)學改變注：H+E1代表缺氧+1μmol/LE109處理；H+E4代表缺氧+4μmol/LE109處理；H+E6

在缺氧+E10948小時組，可見部分細胞的偽足仍然存在，存活下來的細胞胞質回縮，發(fā)出偽足的細胞數(shù)目減少，偽足的長度也明顯縮短。部分細胞的偽足甚至出現(xiàn)斷裂。具體如圖3所示。圖3缺氧+E109處理后HUVEC的形態(tài)學改變注：H+E1代表缺氧+1μmol/LE109處理；H+E4代表....

圖4缺氧/饑餓+E109處理后HUVEC的形態(tài)學改變注：H/S+E1、H/S+E4、H/S+E6分別代表缺氧/饑餓環(huán)境下同時給予1μmol/L、

19圖4缺氧/饑餓+E109處理后HUVEC的形態(tài)學改變注：H/S+E1、H/S+E4、H/S+E6分別代表缺氧/饑餓環(huán)境下同時給予1μmol/L、4μmol/L、6μmol/LE109處理（后文中出現(xiàn)的縮寫，含義與此處相同，不再注明）。2.1.4缺氧環(huán)境下不同濃度恩度....

圖5缺氧+恩度處理后HUVEC的形態(tài)學改變

部分細胞漂浮死亡，恩度濃度到達800μg/ml時，偽足數(shù)目的減少并不明顯，且漂浮死亡的細胞數(shù)較缺氧+400μg/ml恩度組未見明顯增加。單從形態(tài)學上分析，恩度對缺氧狀態(tài)下的HUVEC抑制作用較弱。具體如圖5所示。圖5缺氧+恩度處理后HUVEC的形態(tài)學改變

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