骨化三醇(1α,25(OH)₂VD₃)主要適應癥有骨質(zhì)疏松癥、特發(fā)性和假性及術(shù)后甲狀旁腺功能低下、腎性骨營養(yǎng)不良等,在老齡化社會具有廣闊的市場前景。目前1α,25(OH)₂VD₃的產(chǎn)量低,導致藥物價格昂貴,提高其產(chǎn)量和降低生產(chǎn)成本對減輕用藥負擔具有重要意義。1α,25(OH)₂VD₃有化學合成和生物催化兩種制備方法,但化學合成法難度大、步驟多、易產(chǎn)生異構(gòu)體且分離純化復雜,而生物催化法步驟少、專一性強且條件溫和,具有替代化學合成的潛力。本論文對自養(yǎng)假諾卡氏菌Pseudonocardia autotrophica CGMCC 7935將25(OH)VD₃轉(zhuǎn)化為1α,25(OH)₂VD₃的過程進行了研究,考察了全細胞催化體系、游離酶催化體系以及固定化酶催化體系合成1α,25(OH)₂VD₃的可行性并對工藝參數(shù)進行了優(yōu)化研究�？疾烊毎呋w系及其條件優(yōu)化...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 1α,25(OH)₂VD₃生理作用及合成方法概述
        1.1.1 1α,25(OH)₂VD₃概述
        1.1.2 1α,25(OH)₂VD₃合成方法概述
    1.2 P450酶及單加氧反應途徑概述
        1.2.1 細胞色素P450概述
        1.2.2 氧還原活化途徑的電子傳遞系統(tǒng)
        1.2.3 過氧化氫分流反應途徑
    1.3 包埋固定化P450技術(shù)概述
    1.4 研究意義與研究內(nèi)容
2 全細胞催化體系合成1α,25(OH)₂VD3

    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 主要試劑及儀器
        2.1.3 培養(yǎng)基及溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 菌株培養(yǎng)
        2.2.2 全細胞催化方法
        2.2.3 HPLC檢測
        2.2.4 全細胞催化體系條件優(yōu)化
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 全細胞催化體系合成1α,25(OH)₂VD₃實驗結(jié)果
        2.3.2 轉(zhuǎn)化時間對催化的影響
        2.3.3 底物溶劑種類對催化的影響
        2.3.4 助溶劑對催化的影響
        2.3.5 底物與助溶劑比例對催化的影響
        2.3.6 金屬離子對催化的影響
        2.3.7 金屬離子濃度對催化的影響
        2.3.8 底物濃度對催化的影響
    2.4 小結(jié)
3 游離酶催化體系過氧化氫分流反應合成1α,25(OH)₂VD₃

    3.1 實驗材料
        3.1.1 主要試劑及儀器
        3.1.2 溶液配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 粗酶液制備方法
        3.2.2 CO差異光譜驗證方法
        3.2.3 游離酶催化體系合成1α,25(OH)₂VD₃方法
        3.2.4 游離酶催化體系條件優(yōu)化
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 CO差異光譜驗證結(jié)果
        3.3.2 底物體系吐溫80的添加對過氧化氫分流反應的影響
        3.3.3 助溶劑的添加對過氧化氫分流反應的影響
        3.3.4 β-環(huán)糊精對過氧化氫分流反應的影響
        3.3.5 溫度對過氧化氫分流反應的影響
        3.3.6 pH對過氧化氫分流反應的影響
        3.3.7 H₂O₂濃度對過氧化氫分流反應的影響
        3.3.8 底物濃度對積累量的影響
    3.4 小結(jié)
4 固定化酶催化體系合成1α,25(OH)₂VD₃

    4.1 實驗材料
        4.1.1 主要試劑及儀器
        4.1.2 溶液配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 海藻酸鈣膠粒制備
        4.2.2 固定化酶催化過氧化氫分流反應
        4.2.3 固定化酶制備優(yōu)化及性質(zhì)考察
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 膠粒外觀
        4.3.2 固定化酶催化結(jié)果
        4.3.3 海藻酸鈉濃度對催化的影響
        4.3.4 氯化鈣濃度對催化的影響
        4.3.5 固定化酶的熱穩(wěn)定性
        4.3.6 固定化酶的pH穩(wěn)定性
        4.3.7 H₂O₂濃度對固定化酶催化的影響
    4.4 小結(jié)
5 本文結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 展望
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文及科研成果
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3898394

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