【背景】抗菌肽Merecidin可抑制臨床菌株銅綠假單胞菌PA03生物被膜。PA4781基因是課題組通過生物信息學(xué)分析篩選出的差異表達(dá)基因,PA4781作為細(xì)菌第二信使分子環(huán)二鳥苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)的磷酸二酯酶具有降解c-di-GMP的作用,其在抗菌肽Merecidin抑制生物被膜中的作用機(jī)制尚不清楚�！灸康摹垦芯考�(xì)菌第二信使分子c-di-GMP的磷酸二酯酶PA4781基因在抗菌肽Merecidin抑制銅綠假單胞菌生物被膜中的作用�！痉椒ā坷脝螇A基突變技術(shù)敲除PA4781基因,Sanger測(cè)序方法檢測(cè)敲除的正確性。采用結(jié)晶紫染色法觀察PA03菌株、PA4781過表達(dá)菌株、PA4781敲除菌株24 h生物被膜生長(zhǎng)情況,以及在抗菌肽Merecidin 24、48、72μmol/L作用下各菌株生物被膜的生長(zhǎng)情況。采用對(duì)羥基聯(lián)苯溶液顯色法檢測(cè)在抗菌肽Merecidin 48、72μmol/L作用下,PA03菌株、PA4781過表達(dá)菌株、PA4781敲除菌株生物被膜藻酸鹽的變化情況。【結(jié)果】Sanger測(cè)序結(jié)果顯示,用pnCasPABEC系統(tǒng)成功實(shí)現(xiàn)了...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 抗菌肽Merecidin
        1.1.3 主要試劑和儀器及培養(yǎng)基
        1.1.4 PCR引物
    1.2 PA4781敲除載體構(gòu)建
        1.2.1 sgRNA的設(shè)計(jì)及相關(guān)引物合成
        1.2.2 sgRNA載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)化篩選
        1.2.3 PA03菌株電轉(zhuǎn)感受態(tài)制備[15]
        1.2.4 敲除質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)化及驗(yàn)證
    1.3 結(jié)晶紫法定量檢測(cè)Merecidin在不同濃度作用下正常株、過表達(dá)株、敲除株生物被膜的變化情況
    1.4 不同濃度抗菌肽Merecidin作用下受試菌生物被膜藻酸鹽產(chǎn)生量變化情況
    1.5 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 敲除載體構(gòu)建
        2.1.1 sgRNA設(shè)計(jì)
        2.1.2 sgRNA載體構(gòu)建
        2.1.3 敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)化并篩選
    2.2 不同濃度抗菌肽Merecidin作用下正常株、過表達(dá)株、敲除株生物被膜形成情況
    2.3 不同濃度抗菌肽Merecidin作用下受試菌藻酸鹽產(chǎn)生量變化情況
3 討論與結(jié)論



本文編號(hào)：3811223