【背景】抗菌肽Merecidin可抑制臨床菌株銅綠假單胞菌PA03生物被膜。PA4781基因是課題組通過生物信息學分析篩選出的差異表達基因,PA4781作為細菌第二信使分子環(huán)二鳥苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)的磷酸二酯酶具有降解c-di-GMP的作用,其在抗菌肽Merecidin抑制生物被膜中的作用機制尚不清楚�！灸康摹垦芯考毦诙攀狗肿觕-di-GMP的磷酸二酯酶PA4781基因在抗菌肽Merecidin抑制銅綠假單胞菌生物被膜中的作用。【方法】利用單堿基突變技術敲除PA4781基因,Sanger測序方法檢測敲除的正確性。采用結晶紫染色法觀察PA03菌株、PA4781過表達菌株、PA4781敲除菌株24 h生物被膜生長情況,以及在抗菌肽Merecidin 24、48、72μmol/L作用下各菌株生物被膜的生長情況。采用對羥基聯(lián)苯溶液顯色法檢測在抗菌肽Merecidin 48、72μmol/L作用下,PA03菌株、PA4781過表達菌株、PA4781敲除菌株生物被膜藻酸鹽的變化情況�！窘Y果】Sanger測序結果顯示,用pnCasPABEC系統(tǒng)成功實現(xiàn)了...

【文章頁數(shù)】：12 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 抗菌肽Merecidin
        1.1.3 主要試劑和儀器及培養(yǎng)基
        1.1.4 PCR引物
    1.2 PA4781敲除載體構建
        1.2.1 sgRNA的設計及相關引物合成
        1.2.2 sgRNA載體構建、轉化及轉化篩選
        1.2.3 PA03菌株電轉感受態(tài)制備[15]
        1.2.4 敲除質(zhì)粒的電轉化及驗證
    1.3 結晶紫法定量檢測Merecidin在不同濃度作用下正常株、過表達株、敲除株生物被膜的變化情況
    1.4 不同濃度抗菌肽Merecidin作用下受試菌生物被膜藻酸鹽產(chǎn)生量變化情況
    1.5 數(shù)據(jù)處理
2 結果與分析
    2.1 敲除載體構建
        2.1.1 sgRNA設計
        2.1.2 sgRNA載體構建
        2.1.3 敲除質(zhì)粒轉化并篩選
    2.2 不同濃度抗菌肽Merecidin作用下正常株、過表達株、敲除株生物被膜形成情況
    2.3 不同濃度抗菌肽Merecidin作用下受試菌藻酸鹽產(chǎn)生量變化情況
3 討論與結論



本文編號：3811223