發(fā)布時(shí)間：2023-01-30 10:27

　　皮膚創(chuàng)面修復(fù)是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的醫(yī)學(xué)難題,設(shè)計(jì)和開發(fā)快速有效地方法來治療創(chuàng)面是非常有必要的。創(chuàng)面修復(fù)一般而言涉及4個(gè)階段,止血階段,炎癥反應(yīng),增殖及重塑階段;炎癥反應(yīng)和細(xì)胞增殖是人為可干預(yù)并有效促進(jìn)創(chuàng)面愈合的階段。5-羥甲基糠醛具有多種有益的生物學(xué)功能,如抗氧化、抗急性低壓缺氧和心臟保護(hù)功能等,但較少文獻(xiàn)研究其抗炎及應(yīng)用于創(chuàng)面修復(fù)方面。本文主要對5-羥甲基糠醛的抗炎作用及藥理機(jī)制進(jìn)行探究,同時(shí)以聚乙烯醇/海藻酸鈉水凝膠載體,探究5-羥甲基糠醛在體外和體內(nèi)創(chuàng)面修復(fù)的效果和機(jī)理。1.本文以LPS誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞為炎癥模型,探究5-羥甲基糠醛的抗炎效果和相關(guān)機(jī)制。結(jié)果顯示:5-羥甲基糠醛以濃度依賴性的方式降低一氧化氮（NO）,前列腺素E2（PGE2）和促炎細(xì)胞因子（TNF-α,IL-1β和IL-6）的含量。同時(shí),經(jīng)5-羥甲基糠醛預(yù)處理的細(xì)胞能顯著下調(diào)兩種主要炎癥介質(zhì):一氧化氮合酶（iNOS）和環(huán)氧合酶-2（COX-2）的mRNA表達(dá),并抑制促炎細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)。5-羥甲基糠醛通過抑制細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK1/2）,c-Jun N末端激酶（JNK）,IκBα,NF-κ... 

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 炎癥生理學(xué)和治療方法
    1.2 皮膚創(chuàng)面修復(fù)過程
        1.2.1 創(chuàng)面愈合過程
        1.2.2 巨噬細(xì)胞在創(chuàng)面修復(fù)過程中的作用
        1.2.3 皮膚成纖維細(xì)胞在創(chuàng)面修復(fù)過程中的作用
    1.3 創(chuàng)面敷料研究進(jìn)展
        1.3.1 傳統(tǒng)敷料
        1.3.2 水凝膠敷料
            1.3.2.1 水凝膠的制備
            1.3.2.2 水凝膠的材料
        1.3.3 其他創(chuàng)面敷料
    1.4 5-羥甲基糠醛
    1.5 研究意義
    1.6 研究內(nèi)容
第二章 5-羥甲基糠醛的抗炎作用及機(jī)制研究
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 細(xì)胞系
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.4 試劑的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)操作步驟流程
        2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.3.2.2 細(xì)胞傳代
            2.3.2.3 細(xì)胞凍存
        2.3.3 細(xì)胞活性檢測
        2.3.4 細(xì)胞培養(yǎng)液NO含量檢測
        2.3.5 細(xì)胞炎癥因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)和PGE2含量的測定
            2.3.5.1 細(xì)胞上清液的收集
            2.3.5.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
        2.3.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測RAW264.7巨噬細(xì)胞的mRNA的表達(dá)量
            2.3.6.1 RAW264.7巨噬細(xì)胞總RNA的提取
            2.3.6.3 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
            2.3.6.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.3.7 細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)檢測
        2.3.8 Western blot檢測蛋白質(zhì)的相對含量表達(dá)
            2.3.8.1 細(xì)胞處理和收集步驟
            2.3.8.2 BCA法檢測蛋白質(zhì)濃度
            2.3.8.3 SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳
            2.3.8.4 轉(zhuǎn)膜
            2.3.8.5 蛋白質(zhì)印記檢測
        2.3.9 p65核易位免疫熒光染色
        2.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 5-HMF的細(xì)胞毒性檢測
        2.4.2 5-HMF對NO和PGE2的含量的作用
        2.4.3 5-HMF對炎癥細(xì)胞因子(TNF-α,IL-1β和IL-6)表達(dá)的影響
        2.4.4 5-HMF對iNOS,COX-2,TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA表達(dá)的影響
        2.4.5 5-HMF對細(xì)胞活性氧的作用
        2.4.6 5-HMF對MAPK,Akt/ mTOR和NF-κB信號通路的影響
        2.4.7 5-HMF對NF-κB p65核易位的影響
    2.5 本章小結(jié)
第三章 5-羥甲基糠醛對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖及遷移的影響
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 細(xì)胞系
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)操作步驟流程
        3.3.2 HSF細(xì)胞培養(yǎng)
            3.3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            3.3.2.2 細(xì)胞傳代
            3.3.2.3 細(xì)胞凍存
        3.3.3 MTT法檢測5-HMF對皮膚成纖維細(xì)胞的增殖影響
        3.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測5-HMF對經(jīng)CFSE標(biāo)記人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖
        3.3.5 劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.3.6 Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)
        3.3.7 羥脯氨酸含量的測定
        3.3.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ mRNA的表達(dá)
            3.3.8.1 HSF細(xì)胞總RNA的提取
            3.3.8.2 總RNA濃度及純度的測定
            3.3.8.3 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
            3.3.8.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        3.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 5-HMF對皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響
        3.4.2 流式細(xì)胞術(shù)測試5-HMF對CFSE標(biāo)記皮膚成纖維細(xì)胞影響
        3.4.3 劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.4.4 Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)
        3.4.5 藥物5-HMF對HSF分泌羥脯氨酸的影響
        3.4.6 qPCR法檢測皮膚成纖維細(xì)胞膠原的mRNA表達(dá)量
    3.5 本章小結(jié)
第四章 載藥聚乙烯醇/海藻酸鈉水凝膠創(chuàng)面修復(fù)的研究
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 細(xì)胞系
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.4 試劑的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 實(shí)驗(yàn)操作步驟流程
        4.3.2 水凝膠的制備
        4.3.3 納米銀的制備和表征
        4.3.4 PVA/海藻酸鈉水凝膠的表征測試
            4.3.4.1 凝膠分?jǐn)?shù)的測定
            4.3.4.2 水凝膠溶脹性能和含水量的測定
            4.3.4.3 水凝膠形貌觀察
            4.3.4.4 水凝膠傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)分析
            4.3.4.5 水凝膠的熱分析
            4.3.4.6 水凝膠的機(jī)械性能分析
            4.3.4.6 載藥水凝膠的藥物釋放測試
            4.3.4.7 水凝膠浸提液的生物相容性測試
            4.3.4.8 水凝膠的抑菌測試
            4.3.4.9 SEM觀察載Ag-NPs的PVA/海藻酸鈉水凝膠
            4.3.4.10 SEM觀察細(xì)胞在水凝膠上粘附情況
        4.3.5 載藥水凝膠創(chuàng)面敷料體內(nèi)修復(fù)研究
            4.3.5.1 創(chuàng)面模型建立
            4.3.5.2 創(chuàng)面修復(fù)
            4.3.5.3 組織包埋與切片
            4.3.5.4 HE染色
            4.3.5.5 Masson染色
            4.3.5.6 天狼猩紅染色
            4.3.5.7 VEGF和CD31免疫組化染色
        4.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 納米銀的表征
        4.4.2 水凝膠的表征
            4.4.2.1 水凝膠的凝膠分?jǐn)?shù)、含水量、溶脹曲線
            4.4.2.2 水凝膠的形貌觀察
            4.4.2.3 水凝膠FT-IR分析
            4.4.2.4 水凝膠的熱分析
            4.4.2.5 水凝膠的機(jī)械性能
            4.4.2.6 水凝膠的藥物釋放曲線
            4.4.2.7 水凝膠的生物相容性測試
            4.4.2.8 水凝膠的抑菌效果
            4.4.2.9 Ag-NPs水凝膠表面形貌和EDS分析
            4.4.2.10 水凝膠的細(xì)胞粘附情況
        4.4.3 體內(nèi)創(chuàng)面修復(fù)
            4.4.3.1 創(chuàng)面愈合率
            4.4.3.2 HE染色
            4.4.3.3 Masson和天狼猩紅染色
            4.4.3.4 VEGF免疫組化染色
            4.4.3.5 CD31免疫組化染色
        4.4.4 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    創(chuàng)新之處
    展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士/碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件



本文編號：3732977