本研究擬構(gòu)建共載針對(duì)乏氧誘導(dǎo)因子1α （HIF1α）的siRNA及具有壞死組織親和性的金絲桃素的PLGA-PEI納米粒,并進(jìn)行透明質(zhì)酸（HA）修飾,研究其理化性質(zhì)的同時(shí)評(píng)價(jià)該載體對(duì)腫瘤的體內(nèi)外靶向性,以期研制出一種高效、低毒、穩(wěn)定的靶向放療增敏藥物。 第一部分乏氧細(xì)胞模型制作及針對(duì)乏氧誘導(dǎo)因子1α （HIF-1α）的siRNA的構(gòu)建和篩選：利用western blot方法檢測(cè)出最佳的使鼻咽癌細(xì)胞CNE2乏氧的二氯化鈷濃度,以模擬乏氧細(xì)胞的狀態(tài),為接下來的實(shí)驗(yàn)創(chuàng)造最佳條件。western blot結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)加入150μmol/l的二氧化鈷對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE2的HIF-1α表達(dá)抑制效果最佳。同時(shí),設(shè)計(jì)針對(duì)乏氧誘導(dǎo)因子1α （HIF1α）表達(dá)的6對(duì)（siRNA1217,siRNA1612,siRNA2258,siRNA2752, siRNA3724,siRNA3168）及一條陰性對(duì)照siRNA（稱為NC）。在Lipofectamine2000介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染人鼻咽癌細(xì)胞系CNE2。同時(shí)采用RT-PCR法和Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞中HIF-1α含量,以β-actin蛋白做內(nèi)參照... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
目錄
第一章 ：前言
第二章 ：乏氧模型建立及HIF-1α-siRNA有效干擾序列篩選
    一. 儀器與試藥
        1.1 儀器
        1.2 主要試藥
    二. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 乏氧細(xì)胞模型的構(gòu)建
        2.2 有效干擾HIF-1α的siRNA序列篩選
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    三. 結(jié)果與討論
        3.1 乏氧細(xì)胞模型的制作
        3.2 HIF-1α-siRNA有效干擾序列篩選
    四. 小結(jié)
第三章 透明質(zhì)酸修飾載金絲桃素納米粒的制備及評(píng)價(jià)
    一. 儀器與試藥
        1.1 儀器
        1.2 試藥
    二. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 納米粒的制備
        2.2 納米粒的外觀考察
        2.3 納米粒的形態(tài)學(xué)考察
        2.4 納米粒的粒徑和電位測(cè)定及透明質(zhì)酸投藥量的影響
        2.5 納米粒的電泳考察
        2.6 細(xì)胞毒性試驗(yàn)
        2.7 透明質(zhì)酸對(duì)納米粒轉(zhuǎn)染效率的影響
    三. 結(jié)果與討論
        3.1 三種納米粒的外觀考察
        3.2 納米粒的顯微形態(tài)學(xué)表征結(jié)果
        3.3 納米粒的粒徑、電位圖
        3.4 透明質(zhì)酸投藥量對(duì)納米粒粒徑、電位的影響
        3.5 電泳考察結(jié)果
        3.6 MTT結(jié)果
        3.7 透明質(zhì)酸對(duì)納米粒轉(zhuǎn)染效率的影響
    四. 本章小結(jié)
第四章 ：載金絲桃素納米粒的體外靶向性考察及其體內(nèi)壞死親和性初探
    一. 儀器與試藥
        1.1 儀器
        1.2 試藥與材料
    二. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        2.3 激光共聚焦顯微鏡觀察siRNA胞內(nèi)轉(zhuǎn)染效果
        2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染考察
        2.5 細(xì)胞攝取考察
        2.6 受體抑制實(shí)驗(yàn)
        2.7 在體靶向性考察
    三. 結(jié)果與討論
        3.1 激光共聚焦顯微鏡觀察siRNA胞內(nèi)轉(zhuǎn)染效果
        3.2 PLGA-PEI納米粒及HA-PLGA-PEI納米粒的細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果
        3.3 載金絲桃素的PLGA-PEI細(xì)胞攝取結(jié)果
        3.4 受體抑制實(shí)驗(yàn)
        3.5 體內(nèi)靶向性考察
    四. 本章小結(jié)
第五章 ：結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者在讀期間所發(fā)表及待發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]替拉扎明調(diào)節(jié)乏氧誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞HIF-1α和OPN mRNA的表達(dá)及其對(duì)放射增敏的作用[J]. 徐鵬,黃建鳴,任源,查曉,鄧碧芳,吳俊輝,郎錦義.  癌癥. 2010(02)
[3]黏附分子CD44與惡性瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 錢皓,凌沛學(xué),王鳳山,張?zhí)烀?  中國生化藥物雜志. 2007(03)
[4]聚丙交酯乙交酯納米粒的制備及生物學(xué)效能的研究[J]. 張蕾,張陽德,翟登高,潘一峰.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2007(11)
[5]注射用載胸苷激酶基因質(zhì)粒PLGA納米粒的質(zhì)量研究[J]. 何勤,劉戟,徐超群,張志榮.  中國醫(yī)藥工業(yè)雜志. 2006(10)
[6]透明質(zhì)酸及其鈉鹽在藥物制劑中的應(yīng)用[J]. 王豫輝.  食品與藥品. 2005(08)
[7]金絲桃素光動(dòng)力學(xué)療法與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抗凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)[J]. 白潔,楊得坡.  中草藥. 2004(01)



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