目的:SHP2是整合來自不同細胞表面受體的信號與細胞內(nèi)主要細胞信號傳導(dǎo)途徑的關(guān)鍵節(jié)點;其異常激活有可能導(dǎo)致血液惡性腫瘤的發(fā)生。據(jù)此,SHP2已經(jīng)成為治療血液惡性腫瘤的靶點之一。本研究目的是通過構(gòu)建SHP2酶活評價體系,對實驗室前期獲得的噻吩[2,3-d]嘧啶類化合物進行SHP2-PTP酶活性測定,獲得SHP2抑制劑,并對其進行細胞活性研究,在細胞水平上驗證其對SHP2的抑制作用。最后,通過分子對接和分子動力學(xué)研究抑制劑與SHP2的作用模式。為尋找以SHP2為靶點的新型抗癌藥提供新的思路。方法:1.SHP2抑制劑的活性研究:（1）建立SHP2酶活性測定體系并進行酶活性測定:將SHP2-PTP質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中,通過細菌擴增,IPTG誘導(dǎo)SHP2-PTP蛋白表達,獲得足量的蛋白。然后利用Ni-NTA重力柱對蛋白進行純化,得到較純的SHP2-PTP蛋白。最后,以pNPP為底物,測定化合物對SHP2-PTP酶活的影響。（2）細胞活性測定:首先,對H460和Hela兩種細胞系進行細胞培養(yǎng),獲得處于對數(shù)期生長的細胞。采用不同濃度的化合物處理H460和Hela兩種細胞,共同孵育48小時。利... 

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、SHP2酶活性測定體系的建立和酶活性測定
    1.1 材料與方法
        1.1.1 緩沖液的配制
        1.1.2 儀器與試劑
        1.1.3 SHP2-PTP蛋白
        1.1.4 SHP2-PTP酶活性實驗
    1.2 結(jié)果與討論
        1.2.1 SHP2-PTP蛋白
        1.2.2 酶活性實驗
    1.3 小結(jié)
二、化合物的細胞活性研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 所用藥品和試劑、耗材
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 細胞培養(yǎng)
        2.1.5 細胞增殖實驗(MTT法)
        2.1.6 細胞凋亡檢測
        2.1.7 Western Blot
    2.2 結(jié)果與討論
        2.2.1 細胞增殖實驗
        2.2.2 細胞凋亡實驗
        2.2.3 Western Blot實驗
    2.3 小結(jié)
三、分子對接、分子動力學(xué)模擬及ADMET預(yù)測
    3.1 材料與方法
        3.1.1 分子精準(zhǔn)對接
        3.1.2 分子動力學(xué)模擬
        3.1.3 化合物的ADMET預(yù)測
    3.2 結(jié)果與討論
        3.2.1 對接
        3.2.2 分子動力學(xué)模擬
        3.2.3 ADMET預(yù)測
    3.3 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 SHP2在造血和白血病發(fā)生中的作用
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3679285