發(fā)布時(shí)間：2022-09-17 13:10

　　目的:SHP2是整合來(lái)自不同細(xì)胞表面受體的信號(hào)與細(xì)胞內(nèi)主要細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn);其異常激活有可能導(dǎo)致血液惡性腫瘤的發(fā)生。據(jù)此,SHP2已經(jīng)成為治療血液惡性腫瘤的靶點(diǎn)之一。本研究目的是通過(guò)構(gòu)建SHP2酶活評(píng)價(jià)體系,對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期獲得的噻吩[2,3-d]嘧啶類化合物進(jìn)行SHP2-PTP酶活性測(cè)定,獲得SHP2抑制劑,并對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞活性研究,在細(xì)胞水平上驗(yàn)證其對(duì)SHP2的抑制作用。最后,通過(guò)分子對(duì)接和分子動(dòng)力學(xué)研究抑制劑與SHP2的作用模式。為尋找以SHP2為靶點(diǎn)的新型抗癌藥提供新的思路。方法:1.SHP2抑制劑的活性研究:（1）建立SHP2酶活性測(cè)定體系并進(jìn)行酶活性測(cè)定:將SHP2-PTP質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中,通過(guò)細(xì)菌擴(kuò)增,IPTG誘導(dǎo)SHP2-PTP蛋白表達(dá),獲得足量的蛋白。然后利用Ni-NTA重力柱對(duì)蛋白進(jìn)行純化,得到較純的SHP2-PTP蛋白。最后,以pNPP為底物,測(cè)定化合物對(duì)SHP2-PTP酶活的影響。（2）細(xì)胞活性測(cè)定:首先,對(duì)H460和Hela兩種細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得處于對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)胞。采用不同濃度的化合物處理H460和Hela兩種細(xì)胞,共同孵育48小時(shí)。利... 

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、SHP2酶活性測(cè)定體系的建立和酶活性測(cè)定
    1.1 材料與方法
        1.1.1 緩沖液的配制
        1.1.2 儀器與試劑
        1.1.3 SHP2-PTP蛋白
        1.1.4 SHP2-PTP酶活性實(shí)驗(yàn)
    1.2 結(jié)果與討論
        1.2.1 SHP2-PTP蛋白
        1.2.2 酶活性實(shí)驗(yàn)
    1.3 小結(jié)
二、化合物的細(xì)胞活性研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 所用藥品和試劑、耗材
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.1.5 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTT法)
        2.1.6 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.1.7 Western Blot
    2.2 結(jié)果與討論
        2.2.1 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.2 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 Western Blot實(shí)驗(yàn)
    2.3 小結(jié)
三、分子對(duì)接、分子動(dòng)力學(xué)模擬及ADMET預(yù)測(cè)
    3.1 材料與方法
        3.1.1 分子精準(zhǔn)對(duì)接
        3.1.2 分子動(dòng)力學(xué)模擬
        3.1.3 化合物的ADMET預(yù)測(cè)
    3.2 結(jié)果與討論
        3.2.1 對(duì)接
        3.2.2 分子動(dòng)力學(xué)模擬
        3.2.3 ADMET預(yù)測(cè)
    3.3 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明
綜述 SHP2在造血和白血病發(fā)生中的作用
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3679285