具有潛在“三致”作用的硝基呋喃類(lèi)抗菌素在國(guó)內(nèi)外雖已禁用二十余年，但時(shí)至今日硝基呋喃類(lèi)抗菌素及其代謝物殘留仍時(shí)有檢出。本文旨在基于免疫學(xué)原理，研究出硝基呋喃類(lèi)代謝物的一種快速檢測(cè)方法，為此，本研究的重點(diǎn)是先制備出靈敏度高、特異性強(qiáng)的單克隆抗體，然后建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA （icELISA）檢測(cè)方法并對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化，最后對(duì)優(yōu)化條件下的icELISA進(jìn)行鑒定。首先，將硝基呋喃類(lèi)代謝物與乙醛酸、對(duì)醛基苯甲酸及對(duì)硝基苯甲醛進(jìn)行衍生合成半抗原及標(biāo)準(zhǔn)品并用液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀進(jìn)行鑒定；采用活潑酯法及混合酸酐法將半抗原與載體蛋白偶聯(lián)合成完全抗原，并用紫外進(jìn)行表征。用免疫原免疫小鼠，通過(guò)不斷地免疫、血清檢測(cè)篩選出效價(jià)高、抑制效果好的小鼠，取其脾臟進(jìn)行細(xì)胞融合并篩選出效果最好的細(xì)胞株，制備腹水、純化，得到單克隆抗體。建立icELISA并對(duì)包被原、標(biāo)準(zhǔn)品溶解用溶劑、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的pH及NaCl濃度進(jìn)行了一系列的優(yōu)化，將優(yōu)化好的icELISA進(jìn)行靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性的鑒定。優(yōu)化結(jié)果顯示，樣品稀釋液的pH及NaCl濃度對(duì)抗體的IC50均有較大影響。通過(guò)icELISA條件的優(yōu)化，成功地將SEM、AHD... 

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 緒論
    1.1 立題背景
    1.2 硝基呋喃概述
        1.2.1 硝基呋喃類(lèi)抗菌素的理化性質(zhì)及藥理性質(zhì)
        1.2.2 硝基呋喃的代謝
        1.2.3 硝基呋喃的毒害作用及使用現(xiàn)狀
    1.3 硝基呋喃檢測(cè)方法
        1.3.1 硝基呋喃代謝物檢測(cè)的樣品前處理方法
        1.3.2 儀器檢測(cè)方法
        1.3.3 免疫學(xué)檢測(cè)方法
    1.4 本課題研究?jī)?nèi)容及意義
第二章 硝基呋喃代謝物半抗原及完全抗原的設(shè)計(jì)、合成與鑒定
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 藥品與試劑
        2.2.2 主要儀器及設(shè)備
        2.2.3 主要溶液
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 呋喃唑酮代謝物 3-氨基-2-惡唑烷酮 (3-Amino-2-oxazolidinone , AOZ) 的合成及鑒定
        2.3.2 半抗原、標(biāo)準(zhǔn)品的設(shè)計(jì)、合成及鑒定
        2.3.3 完全抗原的合成與鑒定
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 AOZ 的液質(zhì)聯(lián)用分析
        2.4.2 半抗原、標(biāo)準(zhǔn)品的鑒定
        2.4.3 完全抗原的鑒定
    2.5 小結(jié)
第三章 單克隆抗體的制備及鑒定
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 藥品與試劑
        3.2.2 主要儀器及設(shè)備
        3.2.3 主要溶液的配制
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.5 其他實(shí)驗(yàn)材料
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 小鼠的免疫
        3.3.2 小鼠血清檢測(cè)
        3.3.3 雜交瘤細(xì)胞株的制備
        3.3.4 單克隆抗體的大量制備
        3.3.5 單克隆抗體的純化
        3.3.6 單克隆抗體的鑒定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 單克隆抗體效價(jià)測(cè)定
        3.4.2 單克隆抗體亞類(lèi)鑒定
    3.5 小結(jié)
第四章 間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 法的建立及優(yōu)化
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 藥品與試劑
        4.2.2 主要儀器及設(shè)備
        4.2.3 ELISA 溶液的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 icELISA 方法的建立
        4.3.2 icELISA 條件的優(yōu)化
        4.3.3 最佳優(yōu)化條件的 icELISA 方法的建立及評(píng)估
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 抗體靈敏度測(cè)定
        4.4.2 icELISA 條件的優(yōu)化
        4.4.3 icELISA 方法的評(píng)估
    4.5 小結(jié)
主要結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄：作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]我國(guó)食品安全問(wèn)題的倫理反思[J]. 韓作珍.  中州學(xué)刊. 2013(08)
[4]我國(guó)食品安全風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別、評(píng)估與管理——基于食品安全事件的實(shí)證分析[J]. 張紅霞,安玉發(fā),張文勝.  經(jīng)濟(jì)問(wèn)題探索. 2013(06)
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[6]食品安全研究的文獻(xiàn)綜述[J]. 謝鈺思,武戈.  消費(fèi)經(jīng)濟(jì). 2012(05)
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博士論文
[1]三聚氰胺單克隆抗體制備及其高靈敏快速檢測(cè)技術(shù)研究[D]. 孫鳳霞.江南大學(xué) 2011

碩士論文
[1]食品中四種重要過(guò)敏原酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究[D]. 鄧小芳.江南大學(xué) 2012
[2]動(dòng)物源性食品中硝基呋喃類(lèi)藥物殘留分析研究[D]. 徐一平.江南大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3676676