具有潛在“三致”作用的硝基呋喃類抗菌素在國內(nèi)外雖已禁用二十余年，但時至今日硝基呋喃類抗菌素及其代謝物殘留仍時有檢出。本文旨在基于免疫學原理，研究出硝基呋喃類代謝物的一種快速檢測方法，為此，本研究的重點是先制備出靈敏度高、特異性強的單克隆抗體，然后建立間接競爭ELISA （icELISA）檢測方法并對其進行優(yōu)化，最后對優(yōu)化條件下的icELISA進行鑒定。首先，將硝基呋喃類代謝物與乙醛酸、對醛基苯甲酸及對硝基苯甲醛進行衍生合成半抗原及標準品并用液相色譜串聯(lián)四級桿飛行時間質譜儀進行鑒定；采用活潑酯法及混合酸酐法將半抗原與載體蛋白偶聯(lián)合成完全抗原，并用紫外進行表征。用免疫原免疫小鼠，通過不斷地免疫、血清檢測篩選出效價高、抑制效果好的小鼠，取其脾臟進行細胞融合并篩選出效果最好的細胞株，制備腹水、純化，得到單克隆抗體。建立icELISA并對包被原、標準品溶解用溶劑、標準品稀釋液的pH及NaCl濃度進行了一系列的優(yōu)化，將優(yōu)化好的icELISA進行靈敏度、特異性、準確性的鑒定。優(yōu)化結果顯示，樣品稀釋液的pH及NaCl濃度對抗體的IC50均有較大影響。通過icELISA條件的優(yōu)化，成功地將SEM、AHD... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 緒論
    1.1 立題背景
    1.2 硝基呋喃概述
        1.2.1 硝基呋喃類抗菌素的理化性質及藥理性質
        1.2.2 硝基呋喃的代謝
        1.2.3 硝基呋喃的毒害作用及使用現(xiàn)狀
    1.3 硝基呋喃檢測方法
        1.3.1 硝基呋喃代謝物檢測的樣品前處理方法
        1.3.2 儀器檢測方法
        1.3.3 免疫學檢測方法
    1.4 本課題研究內(nèi)容及意義
第二章 硝基呋喃代謝物半抗原及完全抗原的設計、合成與鑒定
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 藥品與試劑
        2.2.2 主要儀器及設備
        2.2.3 主要溶液
    2.3 實驗方法
        2.3.1 呋喃唑酮代謝物 3-氨基-2-惡唑烷酮 (3-Amino-2-oxazolidinone , AOZ) 的合成及鑒定
        2.3.2 半抗原、標準品的設計、合成及鑒定
        2.3.3 完全抗原的合成與鑒定
    2.4 結果與討論
        2.4.1 AOZ 的液質聯(lián)用分析
        2.4.2 半抗原、標準品的鑒定
        2.4.3 完全抗原的鑒定
    2.5 小結
第三章 單克隆抗體的制備及鑒定
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 藥品與試劑
        3.2.2 主要儀器及設備
        3.2.3 主要溶液的配制
        3.2.4 實驗動物
        3.2.5 其他實驗材料
    3.3 實驗方法
        3.3.1 小鼠的免疫
        3.3.2 小鼠血清檢測
        3.3.3 雜交瘤細胞株的制備
        3.3.4 單克隆抗體的大量制備
        3.3.5 單克隆抗體的純化
        3.3.6 單克隆抗體的鑒定
    3.4 結果與討論
        3.4.1 單克隆抗體效價測定
        3.4.2 單克隆抗體亞類鑒定
    3.5 小結
第四章 間接競爭 ELISA 法的建立及優(yōu)化
    4.1 前言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 藥品與試劑
        4.2.2 主要儀器及設備
        4.2.3 ELISA 溶液的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 icELISA 方法的建立
        4.3.2 icELISA 條件的優(yōu)化
        4.3.3 最佳優(yōu)化條件的 icELISA 方法的建立及評估
    4.4 結果與討論
        4.4.1 抗體靈敏度測定
        4.4.2 icELISA 條件的優(yōu)化
        4.4.3 icELISA 方法的評估
    4.5 小結
主要結論
致謝
參考文獻
附錄：作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]三聚氰胺單克隆抗體制備及其高靈敏快速檢測技術研究[D]. 孫鳳霞.江南大學 2011

碩士論文
[1]食品中四種重要過敏原酶聯(lián)免疫檢測方法的研究[D]. 鄧小芳.江南大學 2012
[2]動物源性食品中硝基呋喃類藥物殘留分析研究[D]. 徐一平.江南大學 2008



本文編號：3676676