研究背景藥物性肝損傷（drug-induced liver injury,DILI）正越來(lái)越成為影響公眾健康和藥物開發(fā)的嚴(yán)重問(wèn)題。臨床前藥物安全性評(píng)估旨在最大限度地避免對(duì)人體健康的潛在風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)降低藥物研發(fā)成本。然而,由于存在種屬差異,常規(guī)的臨床前動(dòng)物安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)與人體DILI存在較差的相關(guān)性�；谌嗽葱约�(xì)胞的體外肝毒性預(yù)測(cè)系統(tǒng)的發(fā)展,有助于解決動(dòng)物實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的種屬差異問(wèn)題,并且體外試驗(yàn)周期短,能夠?qū)崿F(xiàn)高通量檢測(cè),并能探究藥物致肝毒性的機(jī)制信息。但使用任何單一的檢測(cè)終點(diǎn)已被證實(shí)均無(wú)法準(zhǔn)確預(yù)測(cè)人體DILI,因此,以細(xì)胞為基礎(chǔ)的體外多參數(shù)組合預(yù)測(cè)人體DILI,成為新藥開發(fā)早期肝毒性篩選的研究趨勢(shì)。有研究表明,以ROS/ATP的比值作為終點(diǎn)用于檢測(cè)藥物的肝毒性,結(jié)果具有很高的敏感性和特異性。與傳統(tǒng)的單一終點(diǎn)評(píng)價(jià)藥物毒性相比,這種復(fù)合型終點(diǎn)考慮了藥物的多機(jī)制毒性作用,提高了預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性;與現(xiàn)有的多終點(diǎn)組合預(yù)測(cè)系統(tǒng)相比,比值型終點(diǎn)簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)程序,有助于體外肝毒性的標(biāo)準(zhǔn)化預(yù)測(cè),這對(duì)于新藥開發(fā)早期候選化合物的大規(guī)模篩選具有重要意義。因此,這種復(fù)合比值型終點(diǎn)為體外肝毒性的標(biāo)準(zhǔn)化預(yù)測(cè)提供了新思路,具有較... 

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮寫說(shuō)明對(duì)照表
第1章 緒論
    1.1 藥物性肝損傷
    1.2 臨床前藥物肝毒性研究面臨的挑戰(zhàn)
    1.3 體外肝毒性評(píng)價(jià)研究進(jìn)展
        1.3.1 藥物性肝損傷的主要機(jī)制
        1.3.2 體外肝毒性評(píng)價(jià)終點(diǎn)
        1.3.3 體外肝毒性評(píng)價(jià)模型
    1.4 立題依據(jù)
        1.4.1 立題背景
        1.4.2 本課題的研究前提
        1.4.3 細(xì)胞模型選擇依據(jù)
        1.4.4 數(shù)據(jù)分析方法選擇依據(jù)
第2章 8個(gè)候選藥物對(duì)HepG2細(xì)胞活力的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑/試劑盒
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 待測(cè)藥物
        2.1.5 主要試劑的配制
        2.1.6 待測(cè)藥物的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞活力檢測(cè)
        2.2.3 數(shù)據(jù)處理
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 4個(gè)嚴(yán)重肝毒性藥物對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響
        2.3.2 3個(gè)中度肝毒性藥物對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響
        2.3.3 無(wú)肝毒性藥物地塞米松對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響
        2.3.4 不同程度肝毒性藥物對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 基于HepG2細(xì)胞的多參數(shù)肝毒性檢測(cè)系統(tǒng)的建立
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑/試劑盒
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 待測(cè)藥物
        3.1.5 主要試劑的配制
        3.1.6 藥物的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 ROS含量檢測(cè)
        3.2.3 ATP含量檢測(cè)
        3.2.4 caspase3/7含量檢測(cè)
        3.2.5 GSH含量檢測(cè)
        3.2.6 數(shù)據(jù)處理
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 兩種方法檢測(cè)ROS結(jié)果的比較
        3.3.2 用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)鹽酸胺碘酮對(duì)HepG2細(xì)胞不同終點(diǎn)的影響
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 基于HepG2細(xì)胞的多參數(shù)檢測(cè)系統(tǒng)用于肝毒性篩選
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        4.1.2 主要試劑/試劑盒
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 待測(cè)藥物
        4.1.5 主要試劑的配制
        4.1.6 待測(cè)藥物的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 ROS含量檢測(cè)
        4.2.3 ATP含量檢測(cè)
        4.2.4 caspase3/7含量檢測(cè)
        4.2.5 GSH含量檢測(cè)
        4.2.6 數(shù)據(jù)處理
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 27個(gè)藥物的ROS檢測(cè)結(jié)果
        4.3.2 27個(gè)藥物的ATP檢測(cè)結(jié)果
        4.3.3 27個(gè)藥物的caspase檢測(cè)結(jié)果
        4.3.4 27個(gè)藥物的GSH檢測(cè)結(jié)果
        4.3.5 27個(gè)藥物的ROS/ATP檢測(cè)結(jié)果
        4.3.6 27個(gè)藥物的caspase/ATP檢測(cè)結(jié)果
        4.3.7 27個(gè)藥物的GSH/ATP檢測(cè)結(jié)果
        4.3.8 ROS、ATP、caspase及GSH預(yù)測(cè)DILI的能力比較
        4.3.9 ATP、ROS/ATP、caspase/ATP及GSH/ATP預(yù)測(cè)DILI的能力比較
        4.3.10 ROS/ATP預(yù)測(cè)DILI的性能
        4.3.11 ROS/ATP區(qū)分不同臨床表型肝毒性藥物的性能
    4.4 討論
        4.4.1 27個(gè)藥物對(duì)HepG2細(xì)胞不同檢測(cè)終點(diǎn)的影響
        4.4.2 ROS/ATP可用于區(qū)分具有不同程度肝毒性的藥物
        4.4.3 本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)與其他檢測(cè)系統(tǒng)相比具有優(yōu)越的評(píng)估性能
        4.4.4 影響本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)預(yù)測(cè)的因素
    4.5 本章小結(jié)
第5章 ROS/ATP的比值在hiPSCs分化的肝細(xì)胞的肝毒性檢測(cè)中的應(yīng)用
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        5.1.2 主要試劑/試劑盒
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.4 待測(cè)藥物
        5.1.5 主要試劑的配制
        5.1.6 待測(cè)藥物的配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 ROS含量檢測(cè)
        5.2.2 ATP含量檢測(cè)
        5.2.3 數(shù)據(jù)處理
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 不同來(lái)源的hiPSC-HLCs的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
        5.3.2 候選藥物對(duì)NovoCell~(TM)-Hepatocytes的影響
        5.3.3 候選藥物對(duì)IxCell~(TM)-Hepatocytes的影響
        5.3.4 不同細(xì)胞模型比較
    5.4 討論
        5.4.1 待測(cè)藥物的肝毒性及檢測(cè)結(jié)果
        5.4.2 hiPSC-HLCs可能有助于提高ROS/ATP檢測(cè)的靈敏度
        5.4.3 hiPSC-HLCs的定向分化及面臨的挑戰(zhàn)
    5.5 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
創(chuàng)新性分析
對(duì)進(jìn)一步研究工作的設(shè)想和建議
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3672210