發(fā)布時(shí)間：2022-01-13 09:52

　　目的:納米氧化鋅廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域,其顆粒引起的神經(jīng)毒性越來越得到重視。本研究以SH-SY5Y為細(xì)胞模型,通過比較三種不同粒徑的納米氧化鋅（10 nm、50 nm、100 nm）的細(xì)胞毒性差異,選取毒性最大的50 nm納米氧化鋅用作后續(xù)的毒性機(jī)制研究,采用多種分子生物學(xué)技術(shù),對(duì)自噬和線粒體自噬在納米氧化鋅誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性機(jī)制中是否參與以及起何種作用進(jìn)行了初步探討,并進(jìn)一步研究納米氧化鋅的毒性作用機(jī)制,以期為納米氧化鋅的生物安全性研究提供一定的理論依據(jù)。方法:1.通過CCK-8法、LDH釋放實(shí)驗(yàn)檢測納米氧化鋅對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的毒性作用。利用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡情況。Western blot觀察納米氧化鋅對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞caspase9、caspase3、bcl-2、bax蛋白表達(dá)水平的影響。2.通過免疫熒光法觀察納米氧化鋅對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞LC3蛋白表達(dá)的影響。Western blot觀察納米氧化鋅對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞P62、LC3、Beclin 1等自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。通過CCK-8、流式觀察自噬抑制劑3-MA、自噬激動(dòng)劑雷帕霉素對(duì)納... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

0nm、50nm、100nm納米氧化鋅對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞毒性作用(A：CCK-8；B：LDH)

圖 1-2 納米氧化鋅誘導(dǎo) SH-SY5Y 細(xì)胞凋亡的流式分析。exin V-FITC/PI 雙染法檢測細(xì)胞凋亡率的結(jié)果；B：細(xì)胞凋亡率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果（**P<0.01 表示與對(duì)照組對(duì)比有顯著差異，所有的實(shí)驗(yàn)平行重復(fù) 3 次）氧化鋅可誘導(dǎo) SH-SY5Y 細(xì)胞發(fā)生線粒體途徑介導(dǎo)的凋亡-3所示，納米氧化鋅處理SH-SY5Y細(xì)胞后，可上調(diào)細(xì)胞內(nèi)cleaved capase9 和 bax 的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)細(xì)胞內(nèi) bcl-2 的表達(dá)水平，說明納米-SY5Y 細(xì)胞發(fā)生線粒體途徑介導(dǎo)的凋亡。

**P<0.01 表示與對(duì)照組對(duì)比有顯著差異，所有的實(shí)驗(yàn)平行重復(fù) 3 次）2.3 納米氧化鋅可誘導(dǎo) SH-SY5Y 細(xì)胞發(fā)生線粒體途徑介導(dǎo)的凋亡如圖1-3所示，納米氧化鋅處理SH-SY5Y細(xì)胞后，可上調(diào)細(xì)胞內(nèi)cleaved caspase3、cleaved caspase9 和 bax 的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)細(xì)胞內(nèi) bcl-2 的表達(dá)水平，說明納米氧化鋅可誘導(dǎo) SH-SY5Y 細(xì)胞發(fā)生線粒體途徑介導(dǎo)的凋亡。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]強(qiáng)心活力方對(duì)慢性心衰大鼠心肌MMP-1、MMP-9表達(dá)及心室重構(gòu)的影響[D]. 李文佳.長春中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[4]血管緊張素Ⅱ?qū)ψ慵?xì)胞自噬的影響及機(jī)制研究[D]. 高雪靜.第三軍醫(yī)大學(xué) 2014



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