背景:即使在氧氣充足的情況下,腫瘤細(xì)胞更偏好于使用糖酵解來產(chǎn)生能量,這一現(xiàn)象被稱為瓦博格效應(yīng)。作為丙酮酸類似物,3-溴丙酮酸（3-bromopyruvate,3-Br PA）可抑制腫瘤細(xì)胞中的糖酵解并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（Monocarboxylate transporter 1,MCT1）是一種膜蛋白,可以轉(zhuǎn)運(yùn)乳酸、丙酮酸和其他一元羧酸。然而,MCT1在3-Br PA的抗腫瘤作用中的作用需深入探討。本研究中我們著重于確定3-Br PA在乳腺癌細(xì)胞中的細(xì)胞毒性并評估MCT1對這種效應(yīng)的可能作用。目的:1.觀察3-Br PA對乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用。2.探究3-Br PA對乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響。3.探尋MCT1在3-Br PA誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡中的作用。方法:1.免疫組化和Western blotting分別檢測人乳腺癌組織和多株乳腺癌細(xì)胞中己糖激酶Ⅱ（HexokinaseⅡ,HKⅡ）的表達(dá)情況。2.通過MTT法檢測3-Br PA對多株乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用。3.Western blotting法檢測多株乳腺癌細(xì)胞中MCTs的表達(dá)情況。4.使用MCT1小分子抑制劑AZD39... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

結(jié)果1. HKⅡ在乳腺癌組織和細(xì)胞呈高表達(dá)HKⅡ是催化糖代謝過程中的首個限速酶，其高表達(dá)能夠增加糖酵解速率[32]。因此，我們測定了 HKⅡ在乳腺癌標(biāo)本和多株細(xì)胞中的表達(dá)情況。IHC 實驗表明，相比于正常組織，乳腺癌組織中的 HKⅡ顯著高表達(dá)，且 HKⅡ是表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中的，見圖 2a。使用 Western blotting 對正常乳腺上皮細(xì)胞和八株癌細(xì)胞的中 HKⅡ表達(dá)情況進(jìn)行了測定，實驗表明：八株癌細(xì)胞中的 HKⅡ表達(dá)是明顯高于正常的上皮細(xì)胞 MCF-10A 中 HKⅡ的表達(dá)，見圖 2b。這些結(jié)果表明乳腺癌細(xì)胞的能量代謝可能是失調(diào)的，同時 HKⅡ高表達(dá)也為 3-BrPA 提供了治療基礎(chǔ)。

圖 3. 3-BrPA 對乳腺癌細(xì)胞毒性作用與 MCT1 相關(guān)Figure 3. The inhibitory effect of 3-BrPA on breast cancer depends on MCT1. (a) Breast cancer cellswere treated with different concentrations of 3-BrPA for 24 h. MTT assay was used to determine cellsurvival rate. Data are expressed as mean ± SEM of three independent experiments. (b) Theexpression of MCT1, MCT2, MCT3, and MCT4 was determine d by western blotting using totalprotein isolated from breast cancer cell lines. β-actin was used as an internal control. (c) Theinhibitory effect of AZD3965 in breast cancer cells with high MCT1 expression was measured. (d)Breast cancer cell lines as indicated were treated with 0.1 μM AZD3965 combined with varyingconcentrations of 3-BrPA for 24 h. Data are expressed as mean ± SEM at three independentexperiments. *P < 0.05.3. 3-BrPA 對乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響為了更深入的研究，我們選取四株乳腺癌細(xì)胞用于后續(xù)實驗，兩株（CAL-51和MCF-7）對3-BrPA 敏感的細(xì)胞，兩株（MDA-MB-231和MDA-MB-453）對3-BrPA不敏感的細(xì)胞。我們觀察了不同濃度的 3-BrPA 作用于細(xì)胞 24 h，48 h，72 h 后其

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人參皂苷Rh2調(diào)控PI3K/AKT/GSK-3β信號通路誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡[J]. 石雪萍,李靜,冉建華,熊偉,李海星,郭珮,陳地龍.  中國藥理學(xué)通報. 2017(01)
[2]葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1與腫瘤能量代謝關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 余蘇云,劉兆國,賈琦,陳力川,祝娉婷,陳文星,王愛云,陸茵.  中國藥理學(xué)通報. 2016(07)



本文編號：3577048