發(fā)布時間：2021-12-22 09:28

　　目的:對人生長分化因子-15（human growth differentiation factor-15,hGDF-15）成熟肽基因進行克隆,誘導(dǎo)hGDF-15蛋白表達并對部分表達條件進行優(yōu)化,對建模成功的動物模型注射hGDF-15蛋白觀察其作用,為hGDF-15藥理活性和生物學(xué)功能的研究奠定基礎(chǔ)。方法:利用PCR技術(shù)克隆人GDF-15成熟肽基因,將其連接到pET-28a載體上構(gòu)建pET-28a-hGDF-15原核表達載體;在此基礎(chǔ)上將其轉(zhuǎn)入Rosetta（DE3）大腸桿菌感受態(tài),獲得重組大腸桿菌,分別采用不同溫度（16,25,37℃）、不同IPTG濃度（0.1,0.25,0.5,0.75,1mmol/L）和不同時間（12,24,36,48 h）對其進行誘導(dǎo)表達,對表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE電泳,利用Gel Quant Express軟件對菌體破碎離心的上清組分和沉淀組分進行含量測定,設(shè)計正交試驗,分析上清組分和沉淀組分最適誘導(dǎo)表達條件;選用DAB顯色法對誘導(dǎo)出的蛋白樣品進行Western blot鑒定,利用Ni-Agarose親和柱對表達產(chǎn)物進行純化,設(shè)置不同濃度的GuNTA（2... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

hGDF-15基因和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)

pET-28a(+)載體示意圖

hGDF-15成熟肽基因PCR產(chǎn)物電泳圖譜

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]抗GDF15單克隆抗體制備及功能鑒定[D]. 詹峰.南京醫(yī)科大學(xué) 2011



本文編號：3546168