研究背景:肝細胞癌（HCC）是世界上致死率最高的三大癌癥之一。HCC早期診斷困難,通常發(fā)現(xiàn)時已為晚期,且晚期肝細胞癌惡行程度高,終末期尚缺乏有效的治療方式,因此總體預后很差。所以近些年來人們一直致力于開發(fā)抗肝癌的新型治療方案。目的:構(gòu)建一種具有靶向肝癌、攜帶siRNA、同時保留金納米棒光熱效應的三重功效為一體的多功能納米系統(tǒng)GAL-GNR（GAL-MUA-PEI-GNR）。研究該納米系統(tǒng)介導的靶向沉默小鼠肝癌細胞（Hepa1-6）中的GPC-3基因及對肝癌細胞的生物學功能影響。研究GAL-GNR的靶向性和光熱效應,并確定GAL-GNR-siRNA介導的GPC-3基因沉默聯(lián)合光熱效應對小鼠肝癌的治療效果。方法:1.GAL-GNR納米載體的構(gòu)建:采用經(jīng)典的種子溶液生長法合成金納米棒,并對金納米棒進行功能化修飾。通過紫外可見光譜、透射電子顯微鏡、核磁共振氫譜、動態(tài)光散射粒度儀檢測功能化修飾前后的金納米棒。2.凝膠阻滯實驗檢測GAL-GNR對siRNA的加載能力和在血清中GAL-GNR對siRNA的保護作用。3.MTT法和Calcein-AM/PI雙染色法檢測功能化修飾前后的金納米棒的細胞毒性... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

GNR和GAL-GNR的材料表征A&B.GNR和GAL-GNR的TEM圖像；C.DLS分析檢測納米材料的直徑分布直方圖；D.UV-Vis吸收光譜；E.Zeta電位分析；F.GAL-GNR結(jié)構(gòu)的NMR分析

第4章結(jié)果23Calcein-AM/PI雙染色法結(jié)果與MTT結(jié)果相似，與PBS及GAL-GNR相比，CTAB-GNR在30μg/mL的濃度時開始對Hepa1-6細胞產(chǎn)生細胞毒性。隨著CTAB-GNR濃度的增加，其對細胞的殺傷性更強（圖2B）。使用CTAB-GNR（120μg/mL）孵育處理48h后觀察到約90%以上的細胞死亡（圖2C）。相反，經(jīng)修飾后的GAL-GNR在濃度高達120mg/mL處理48小時條件下，仍未出現(xiàn)明顯的細胞死亡，顯示出良好的細胞相容性。圖2.GNR和GAL-GNR的體外細胞毒性A.MTT法測定納米材料的細胞毒性；B&C.鈣黃綠素-AM（綠色，活細胞）和PI（紅色，死細胞）雙染色法檢測納米材料的細胞毒性。3.3GAL-GNR負載siRNA的能力及其對siRNA的保護作用游離的siRNA在電泳時可沿著凝膠通道移動，隨著結(jié)合siRNA的數(shù)量增加時移動會減慢直至完全停止。此外，結(jié)合siRNA不再與溴化物有效結(jié)合，因此

第4章結(jié)果24熒光強度將相應降低�；嗽�，本實驗采用瓊脂糖凝膠阻滯電泳法來評估GAL-GNR與siRNA結(jié)合能力。凝膠電泳結(jié)果表明，siRNA與GAL-GNR在質(zhì)量比為1∶6（w/w）時siRNA剛好被完全負載（圖3A）。游離siRNA極易被血清中的酶降解，本實驗合成的納米系統(tǒng)重要功能是保護siRNA免受降解。載體結(jié)合后的siRNA與裸露的siRNA相比，在血清中穩(wěn)定存在的時間更長。如圖3B所示，裸露的siRNA在血清中存在12h后僅有微弱熒光，而在載體保護下的siRNA在孵育48h后熒光仍然很強。結(jié)果表明GAL-GNR可以有效防止siRNA在血清中的降解，從而確保體內(nèi)靶向遞送。圖3.凝膠阻滯電泳測定A.瓊脂糖凝膠法測定GAL-GNR對siRNA負載能力；B.GAL-GNR在小鼠血清中對siRNA的保護性作用。3.4GAL-GNR的光熱效應金納米材料具有LSPR特性，可以在近紅外輻射下產(chǎn)生熱能，這種現(xiàn)象稱為光熱效應。為了探究GAL-GNR的光熱轉(zhuǎn)換能力，本實驗使用808nm波長，功率密度為2W/cm2的近紅外光作為輻射源來檢測納米材料的光熱轉(zhuǎn)化能力。如圖4A所示，GAL-GNR的光熱轉(zhuǎn)換效力呈現(xiàn)劑量依賴性，隨著GAL-GNR濃度的增加，GAL-GNR的產(chǎn)熱能力增強。GAL-GNR（100μg/mL）在近紅外激光照射下5min內(nèi)可升溫29℃，半乳糖修飾后的GAL-GNR（100μg/mL）同未修飾的GNR（100μg/mL）相比光熱轉(zhuǎn)換能力相當。緊接著，為了探究GNR光熱效應產(chǎn)生的溫度是否可以殺死癌細胞，我們將

【參考文獻】：
期刊論文
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