硝唑尼特（NTZ）及其活性代謝產(chǎn)物替唑尼特（TIZ）具有廣譜的抗原蟲,抗腸道寄生蟲,抗病毒,抗菌等生物活性。但這些活性的機(jī)制是否與抗炎和抗氧化及其細(xì)胞自噬有關(guān)尚無(wú)研究報(bào)道,為此我們展開了相關(guān)研究以揭示其中的關(guān)系。通過給予Raw264.7細(xì)胞LPS（1μg/mL）刺激建立炎癥和氧化應(yīng)激模型,TIZ（25,50,75,100μM）作用后檢測(cè)IL-6分泌和COX-2的表達(dá)量以評(píng)估TIZ對(duì)炎癥細(xì)胞因子的作用;用DCFH-DA熒光探針檢測(cè)ROS生成;同時(shí),用試劑盒檢測(cè)MDA的生成量,CAT、SOD、GSH-Px酶活性和GSH含量,以評(píng)估TIZ抗細(xì)胞氧化應(yīng)激的作用。結(jié)果顯示,LPS刺激后細(xì)胞表現(xiàn)出顯著性的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激效應(yīng);而給予TIZ處理后,細(xì)胞IL-6分泌和COX-2表達(dá)量隨TIZ處理呈劑量相關(guān)性的下降,ROS和MDA生成量也顯著下降,但GSH含量以及CAT、SOD、GSH-Px酶活性呈劑量相關(guān)性的顯著性上升。由此可見,TIZ能抑制LPS誘導(dǎo)的Raw264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激。但這一新的生物活性其作用機(jī)制是什么,我們還不甚了解。細(xì)胞自噬廣泛參與各種生物作用,TIZ的藥物作用過程也可能... 

【文章來(lái)源】：湘潭大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TIZ（A）和NTZ（B）的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

圖 1-2 NTZ 與 PFOR 的作用機(jī)制[44]對(duì)于少數(shù)嚴(yán)格需氧菌以及兼性厭氧菌而言，NTZ的作用機(jī)制尚不完全清楚， NTZ/TIZ 對(duì)這些細(xì)菌的作用機(jī)制的研究仍在如火如荼的進(jìn)行中，如：Peter 等人研究發(fā)現(xiàn) NTZ 可以通過抑制聚集粘附的毛原纖維和 1 型菌毛的功制了多種革蘭氏陰性菌的伴侶/導(dǎo)聯(lián)（CU）通路，他們還發(fā)現(xiàn) NTZ 通過在外膜阻止引導(dǎo)蛋白的正確折疊抑制尿道致病性大腸桿菌的1型和P型菌毛的繁殖[45]。Carvalho 等人研究發(fā)現(xiàn) NTZ 及其衍生物可以破壞結(jié)核分枝桿菌的膜電位和內(nèi) pH 穩(wěn)態(tài)[46]。但這機(jī)制不能解釋 NTZ 與活性氮中間體協(xié)同抑制結(jié)核桿菌。，Lam 等人提出了另外一種不同的作用機(jī)制：通過合成 NTZ 衍生物，他們發(fā)現(xiàn) NTZ 通過激活自噬的主要負(fù)調(diào)控因子哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶點(diǎn)蛋白信號(hào)遞，增強(qiáng)宿主細(xì)胞自噬水平，并最終達(dá)到抑制宿主細(xì)胞體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌的的效果。因此，推測(cè) NQO1 可能是作為 NTZ 其靶標(biāo)之一進(jìn)而誘發(fā)感染結(jié)核的細(xì)胞自噬從而抑制結(jié)核桿菌的繁殖[45,47]。

50 以時(shí)間和劑量依賴性方式誘導(dǎo) Raw264.7 細(xì)胞自噬。（A）western TIZ（0、25、50、75、100 μM）作用 Raw264.7 細(xì)胞孵育 12 h LC白表達(dá)水平；（B）劑量效應(yīng)圖中 LC3-ΙΙ/LC3-Ι 的定量分析；（C）actin 的定量分析；（D）western blot 檢測(cè) 75 μM 的 TIZ 作用 Raw20、3、6、9、12 h）LC3-Ι、LC3-ΙΙ 和 p62 蛋白表達(dá)水平；（E）時(shí)3-Ι 的定量分析；（F）時(shí)間效應(yīng)圖中 p62 的定量分析；（G）透射電Z（0、75、100 μM）作用 Raw264.7 細(xì)胞 12 h 的自噬情況（1 μm，00），黃色箭頭所指為吞噬泡，紅色箭頭所指為自噬體，藍(lán)色箭頭H）激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度的 TIZ（0、25、50、75、10Raw264.7 細(xì)胞 12 h 細(xì)胞內(nèi)自噬體的數(shù)量（×630）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]硝唑尼特抗AD新用途化合物及嘌呤核苷類PDE2抑制劑的設(shè)計(jì)、合成與活性研究[D]. 邱曉霞.華東理工大學(xué) 2018
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[3]鹽酸小檗堿對(duì)脂多糖所致巨噬細(xì)胞炎癥的抗炎作用及其機(jī)制研究[D]. 朱喜梅.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2015
[4]抗寄生蟲藥硝唑尼特的合成工藝研究[D]. 單環(huán)宇.浙江大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3489236