目的優(yōu)化表達(dá)長效重組人生長激素-Fc(recombiant human growth hormone-Fc,rhGH-Fc)融合蛋白的CHO細(xì)胞培養(yǎng)工藝,并進(jìn)行初步工藝放大。方法采用7 L生物反應(yīng)器培養(yǎng)表達(dá)rhGH-Fc融合蛋白的CHO細(xì)胞,操作參數(shù):轉(zhuǎn)速200 r/min,溫度37℃,pH 7.2±0.1,溶氧值(DO)40%。通過改變對數(shù)增長期的pH(7.2±0.1降至6.9±0.1)及平臺期降溫幅度(37℃降至30及33℃),檢測培養(yǎng)過程中細(xì)胞密度、細(xì)胞活率、培養(yǎng)液滲透壓、葡萄糖及乳酸水平、以蛋白表達(dá)量為指標(biāo),優(yōu)化7 L生物反應(yīng)器培養(yǎng)工藝。應(yīng)用優(yōu)化的最佳工藝進(jìn)行14 L線性放大,通氣量分別設(shè)置為0.5、0.1及0.03 SLPM,檢測蛋白表達(dá)量。結(jié)果 7 L生物反應(yīng)器培養(yǎng)工藝最佳pH為6.9±0.1,最佳溫度為33℃,該工藝下蛋白表達(dá)量高達(dá)1 200 mg/L;14 L生物反應(yīng)器培養(yǎng)工藝最佳通氣量為0.03 SLPM,該工藝下蛋白表達(dá)量為880 mg/L。結(jié)論成功優(yōu)化了表達(dá)rhGH-Fc融合蛋白的CHO細(xì)胞7 L生物反應(yīng)器的培養(yǎng)工藝,并實現(xiàn)了14 L生物反應(yīng)器的放大,本實驗為后續(xù)...

【文章來源】： 中國生物制品學(xué)雜志. 2020,33(10)CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞株
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 細(xì)胞復(fù)蘇
    1.4細(xì)胞種子液的制備
    1.5 7 L生物反應(yīng)器的培養(yǎng)
    1.6 7 L生物反應(yīng)器工藝的優(yōu)化
    1.7 蛋白表達(dá)量的測定
    1.8 14 L生物反應(yīng)器的工藝放大
2 結(jié)果
    2.1 最佳7 L生物反應(yīng)器的工藝條件
        2.1.1 最適培養(yǎng)p H
        2.1.2 最適培養(yǎng)溫度
    2.2 14 L生物反應(yīng)器的工藝放大結(jié)果
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]pH對重組CHO細(xì)胞生長、單抗表達(dá)及質(zhì)量的影響 [J]. 肖尚,鄧崇飛,柯軍,鄢成偉,孫文正,楊彬.  生物技術(shù)通報. 2015(12)
[2]長效蛋白生物藥研究進(jìn)展 [J]. 梁成罡,王軍志.  中國新藥雜志. 2014(20)



本文編號：3478604