氮唑類抗真菌藥物作用靶點是羊毛甾醇14-α去甲基化酶（sterol 14α-demethylase,又名CYP51）。準確探究氮唑類藥物與CYP51酶的結(jié)合模式,有利于從靶酶角度設(shè)計合成活性更好的化合物。利用小分子熒光探針技術(shù),與藥物偶聯(lián),作為一種可視化工具,可對藥物在細胞內(nèi)的分布、與靶點結(jié)合或相互作用情況進行示蹤。然而部分小分子熒光染料自身存在一些不足:1.脂溶性差,不易透過細胞膜,進入真菌細胞;2.染料發(fā)射光譜位于紫外及可見光區(qū),而生物體及其組織在可見光的激發(fā)下自身會發(fā)射熒光,導致嚴重背景干擾,不適于細胞生物成像;3.染料始終帶有熒光,需要洗去以降低背景,應(yīng)用步驟繁瑣,成像信噪比低。本文的研究目的是設(shè)計合成基于氮唑類抗真菌藥物的小分子熒光探針用于真菌細胞CYP51酶成像并利用探針工具初步建立一種體外篩選化合物抗真菌活性的新方法。新型的硅基羅丹明染料,在保留傳統(tǒng)羅丹明染料成像優(yōu)點的同時,通過硅原子取代橋連氧原子,使自身發(fā)射波長紅移至近紅外光區(qū)（600⁹00 nm）從而適用于生物成像。我們在其基礎(chǔ)上引入內(nèi)酯螺環(huán),合成出一種具有熒光“關(guān)-開”機制的新型探針。即未與靶... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CYP51催化羊毛甾醇碳14-位去甲基化

從而獲取目標物濃度變化、時空分布等相關(guān)化學生物信息。生物樣本成像中，本體或組織在可見光的激發(fā)下自身會產(chǎn)生熒光激發(fā)自身的熒光發(fā)射波長大部分處在可見或紫外光區(qū)域，導致兩者熒光相響了樣品的檢測和造影，例如膽紅素和還原性煙酰胺嘌呤二核苷酸PH）的熒光波長范圍為 430～470 nm[19]，血漿中血清蛋白的熒光波長50 nm[20]，故使得可見光區(qū)域的熒光分析法靈敏性、準確性受到了較大較于發(fā)射光光譜處在可見及紫外光區(qū)的信號分子，近紅外熒光探針因其力強、信噪比高、對基體損傷小等突出優(yōu)勢，在生物分析領(lǐng)域備受矚在盡可能保留羅丹明優(yōu)點的同時，設(shè)計、改善其結(jié)構(gòu)，使其最大吸收和至近紅外光區(qū)（650～900 nm），得到一類信噪比高、生物兼容性好的近染料，便成了亟待解決的問題。丹明染料以氧雜蒽環(huán)為基本母核，2008 年 Fu 等[22]將焦寧 Pyronine Y 原子替換成二甲基硅，合成了新型的硅雜蒽環(huán)染料 TMDHS（見圖 3硅后，TMDHS 的吸收和發(fā)射光譜發(fā)生了 90 nm 的紅移。

基于氮唑類抗真菌藥物設(shè)計合成的熒光探針及其真菌細胞成像應(yīng)傳統(tǒng)的羅丹明衍生物包括羅丹明 6G、羅丹明 101、羅丹明 B 的吸收/發(fā)射波長見光區(qū)（500～600 nm），不適合生物體熒光成像。對生物成像來說，將苯基引入雜蒽環(huán)上便于控制探針的熒光性質(zhì)，既可提供適宜的標記位點擴大底物范圍，又過立體位阻穩(wěn)定染料，避免環(huán)境中親和物質(zhì)影響。利用此原理，2011 年 Nagano3]，合成發(fā)展了硅基取代的羅丹明類似物，并命名為硅基羅丹明 SiR（見圖 4）。將 SiR700 與單克隆抗體偶聯(lián)，實現(xiàn)了小鼠惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的靶向近紅外熒光成像


本文編號：3456778