順鉑是臨床上廣泛應(yīng)用的抗癌藥物。銅外排蛋白ATPases的Cu（I）結(jié)合域（MBDs）與順鉑相互作用,參與腫瘤細(xì)胞的耐藥。雖然所有的MBDs具有高序列同源性和相似的蛋白質(zhì)折疊,但不同的MBDs在鉑的轉(zhuǎn)運(yùn)過程中具有不同的功能。四硫代鉬酸鹽（TM）是臨床上用于治療威爾遜疾病的藥物。TM和ATP7B與抗癌藥物順鉑的功能有關(guān)。TM可以提高藥物療效,降低順鉑的耐藥性,而ATP7B參與順鉑的耐藥性,但這些藥物之間的分子機(jī)制和相關(guān)性尚不清楚。為了研究ATPases對順鉑抗癌作用的影響,以及通過小分子藥物克服細(xì)胞耐藥性,提高細(xì)胞對順鉑藥物的敏感性,我們選擇ATP7A/7B的N端金屬結(jié)合域作為研究對象,探索蛋白與順鉑藥物的相互作用,以及四硫代鉬酸銨對順鉑作用于蛋白的影響。具體研究內(nèi)容包括以下幾方面:第一部分系統(tǒng)研究ATPase的N端九個MBDs與順鉑的相互作用,比較金屬結(jié)合域蛋白與順鉑的反應(yīng)活性,并研究了銅存在時對蛋白與順鉑反應(yīng)的影響。通過熒光光譜、紫外-可見吸收光譜、離子交換等手段得到九個金屬結(jié)合域蛋白與順鉑反應(yīng)的活性高低。順鉑與銅結(jié)合區(qū)域的半胱氨酸結(jié)合,且銅的存在對蛋白鉑化起到促進(jìn)作用,但促進(jìn)程度相... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 鉑類藥物簡介
        1.2.1 發(fā)展
        1.2.2 順鉑作用機(jī)理
    1.3 蛋白質(zhì)與鉑類藥物的相互作用
        1.3.1 血清蛋白
        1.3.2 金屬硫蛋白
        1.3.3 鋅指蛋白
    1.4 銅蛋白參與鉑類藥物的耐藥過程
        1.4.1 銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白hCTR1
        1.4.2 銅伴侶蛋白Atox1
        1.4.3 銅泵出蛋白ATPase
    1.5 ATP7A/7B介導(dǎo)鉑耐藥的機(jī)制
        1.5.1 結(jié)合或隔離鉑類藥物
        1.5.2 ATPase介導(dǎo)鉑類藥物的外排
        1.5.3 銅水平調(diào)節(jié)鉑藥物耐藥
    1.6 四硫代鉬酸銨與腫瘤的關(guān)系
        1.6.1 四硫代鉬酸銨的簡介
        1.6.2 四硫代鉬酸銨的抗癌作用
        1.6.3 四硫代鉬酸鹽與銅運(yùn)輸?shù)鞍椎年P(guān)系
    1.7 本課題選題目的與主要研究內(nèi)容
    參考文獻(xiàn)
第2章 ATPase金屬結(jié)合域與順鉑的反應(yīng)
    2.1 引言
        2.1.1 ATPase與順鉑耐藥的關(guān)系
        2.1.2 課題的提出
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 質(zhì)粒構(gòu)建(Ligation-independent cloning,LIC)
        2.2.4 蛋白質(zhì)表達(dá)與純化
        2.2.5 ATPase金屬結(jié)合域與順鉑的反應(yīng)
        2.2.6 銅促進(jìn)蛋白鉑化
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 蛋白的表達(dá)與純化
        2.3.2 各金屬結(jié)合域與順鉑反應(yīng)的差異
        2.3.3 順鉑對蛋白結(jié)合銅的影響
    2.4 討論與總結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第3章 四硫代鉬酸銨抑制金屬結(jié)合域鉑化
    3.1 引言
        3.1.1 順鉑、四硫代鋁酸鹽與細(xì)胞耐藥的關(guān)系
        3.1.2 課題的提出
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 質(zhì)粒構(gòu)建
        3.2.4 蛋白表達(dá)與純化
        3.2.5 TM對蛋白結(jié)構(gòu)的影響
        3.2.6 TM功能檢測
        3.2.7 蛋白質(zhì)鉑化分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 TM誘導(dǎo)MBDs二聚
        3.3.2 TM的功能檢測
        3.3.3 TM抑制蛋白質(zhì)鉑化
        3.3.4 TM誘導(dǎo)MBDs發(fā)生分子內(nèi)交聯(lián)
    3.4 討論與總結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第4章 順鉑從Atox1向ATPase的轉(zhuǎn)移
    4.1 引言
        4.1.1 Atox1與順鉑耐藥的關(guān)系
        4.1.2 Atox1與ATPase的關(guān)系
        4.1.3 課題的提出
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.2.2 Atox1蛋白的表達(dá)與純化
        4.2.3 Pt/Atox1與ATPase金屬結(jié)合域的相互作用
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 順鉑直接反應(yīng)效率與鉑轉(zhuǎn)移效率一致
        4.3.2 蛋白與順鉑直接反應(yīng)效率高于鉑轉(zhuǎn)移效率
        4.3.3 鉑轉(zhuǎn)移效率高于順鉑直接反應(yīng)效率
    4.4 總結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第5章 基于Azurin骨架的人工水解酶設(shè)計(jì)
    5.1 引言
        5.1.1 天青蛋白簡介
        5.1.2 碳酸酐酶簡介
        5.1.3 待解決問題
    5.2 實(shí)驗(yàn)過程
        5.2.1 蛋白突變
        5.2.2 蛋白表達(dá)與純化
        5.2.3 蛋白的催化活性檢測
        5.2.4 蛋白晶體篩選
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 蛋白的表達(dá)與純化
        5.3.2 四突變體的晶體結(jié)構(gòu)
    5.4 總結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
工作總結(jié)與展望
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鉑類抗腫瘤藥物與蛋白質(zhì)的作用機(jī)理[J]. 房田田,曹開明,程嵐軍,趙林泓,劉揚(yáng)中.  中國科學(xué):化學(xué). 2017(02)



本文編號：3449784