膝溝藻毒素1/4（GTX 1/4）是麻痹性貝類(lèi)毒素中最具有代表性的神經(jīng)毒素之一。該毒素主要由海洋藻類(lèi)產(chǎn)生,通過(guò)水生食物鏈在魚(yú)類(lèi)或貝類(lèi)體內(nèi)蓄積。人類(lèi)誤食染毒的海產(chǎn)品后常引起麻痹性貝類(lèi)中毒,主要表現(xiàn)為肌肉麻痹、頭痛惡心、運(yùn)動(dòng)障礙、呼吸困難等中毒癥狀,甚至窒息死亡。其毒性主要是由于GTX 1/4能夠選擇性抑制神經(jīng)細(xì)胞表面的Na+通道,導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)傳輸障礙,進(jìn)而造成神經(jīng)性中毒。目前,常用的海洋生物毒素檢測(cè)方法主要包括小鼠生物學(xué)法、液相色譜法和免疫分析法等,而這些檢測(cè)方法由于耗時(shí)長(zhǎng)、靈敏度低、穩(wěn)定性差等問(wèn)題,已無(wú)法滿足該毒素快速檢測(cè)的需求。因此亟需發(fā)展一種靈敏,特異的檢測(cè)新方法用于海洋神經(jīng)毒素GTX 1/4的快速定量分析。核酸適配體作為一種新型的分子識(shí)別元件,通過(guò)與生物傳感器平臺(tái)相結(jié)合,已經(jīng)發(fā)展出多種新穎的檢測(cè)方法,并在分析診斷,食品安全等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。本研究中利用兩種不同的SELEX技術(shù)（GO-SELEX,MB-SELEX）篩選獲得與海洋神經(jīng)毒素GTX 1/4特異性結(jié)合的高親和力適配體。在篩選過(guò)程中,我們發(fā)現(xiàn)GO-SELEX作為一種先進(jìn)的適配體篩選技術(shù),與傳統(tǒng)的MB-SELEX相比,具有顯... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

生物膜干涉技術(shù)測(cè)定的流程圖

膝溝藻毒素 1/4 核酸適配體的篩選，結(jié)合機(jī)制及其應(yīng)用研究、結(jié)果與討論一）、GTX 1/4 適配體的篩選如圖 4 所示，海洋神經(jīng)毒素 GTX 1/4 核酸適配體的篩選通過(guò) GO-SELEX 和B-SELEX 兩種不同的方法同時(shí)進(jìn)行。

LEX 與 MB-SELEX 方法學(xué)的比較與傳統(tǒng)的 MB-SELEX 相比， GO-SELEX 具有更高的篩選效 在篩選過(guò)程中，其 ssDNA 回收率顯著高于 MB-SELEX（圖 篩選獲得的文庫(kù)具有高度的同源性，且有多條重復(fù)序列，而同源性較低，幾乎無(wú)重復(fù)序列（圖 6、圖 7）；最重要的是，通過(guò)文庫(kù)中有 6 條適配體序列（GO12, GO9, GO37, GO17, GO18/4 高親和力的結(jié)合，且親和力的范圍在幾十至幾百納摩爾之4, GO6）顯示不結(jié)合。然而，通過(guò) MB-SELEX 篩選獲得的序乎不結(jié)合，僅有三條序列（MB3, MB11, MB10）顯示弱相互水平，兩者相差數(shù)百倍。同時(shí)，GO-SELEX 技術(shù)操作簡(jiǎn)單，，且篩選的靶分子無(wú)須固化，從而避免了靶分子由于固化導(dǎo)致SELEX 作為一種先進(jìn)的適配體篩選技術(shù)，具有簡(jiǎn)單、高效、小分子核酸適配體的發(fā)展提供了一種新方法。


本文編號(hào)：3441938