目的:探討5-甲氧基黃酮（5-methoxyflavone）對(duì)基因無義突變的通讀活性,研究該化合物對(duì)無義突變所導(dǎo)致的腫瘤及其它疾病治療的藥物潛力。方法:通過本課題組已經(jīng)建立的無義突變蟲熒光酶細(xì)胞模型,初步篩選出了能夠進(jìn)行無義突變蟲熒光素酶通讀的陽(yáng)性通讀劑黃酮類化合物5-甲氧基黃酮。接著用5-甲氧基黃酮處理含有無義突變蟲熒光素酶的HEK293MUT細(xì)胞,化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)蟲熒光素酶活性,Western blot檢測(cè)蟲熒光素酶蛋白水平;最后用5-甲氧基黃酮處理含有無義突變APC基因的人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29,Western blot檢測(cè)APC蛋白及下游蛋白β-連環(huán)蛋白表達(dá);CCK-8實(shí)驗(yàn)分析5-甲氧基黃酮的細(xì)胞毒性;利用相同方法對(duì)與5-甲氧基黃酮擁有相似結(jié)構(gòu)的化合物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析。結(jié)果:在初步確認(rèn)5-甲氧基黃酮具有無義突變通讀活性后,進(jìn)一步進(jìn)行化合物的檢測(cè)和分析,發(fā)現(xiàn)5-甲氧基黃酮在HEK293MUT細(xì)胞中表現(xiàn)出的通讀效率相比G418更高（P<0.05）。在HT-29細(xì)胞中,隨著劑量升高,5-甲氧基黃酮對(duì)無義突變APC基因蛋白的表達(dá)恢復(fù)也逐漸增強(qiáng)。并且,5-甲氧基黃酮對(duì)無義突變APC基因的通... 

【文章來源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

藥物處理HEK293MUT細(xì)胞后熒光素酶相對(duì)發(fā)光值

武漢科技大學(xué)碩士學(xué)位論文10時(shí)，5-甲氧基黃酮對(duì)無義突變熒光素酶蛋白的表達(dá)恢復(fù)能力也同樣要優(yōu)于參照物G418。圖2藥物處理HEK293MUT細(xì)胞后熒光素酶蛋白表達(dá)恢復(fù)結(jié)果2.3不同濃度5-甲氧基黃酮對(duì)HT-29細(xì)胞無義突變APC基因蛋白表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，不同濃度5-甲氧基黃酮處理過后的HT-29細(xì)胞均表達(dá)APC蛋白，而且隨著濃度的升高，HT-29細(xì)胞APC蛋白表達(dá)也有所提升。這表明5-甲氧基黃酮對(duì)HT-29細(xì)胞無義突變APC基因蛋白表達(dá)恢復(fù)產(chǎn)生了影響。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，5-甲氧基黃酮對(duì)HCT-116細(xì)胞內(nèi)正常APC基因表達(dá)無明顯作用。圖3不同濃度5-甲氧基黃酮對(duì)HT-29細(xì)胞無義突變APC基因蛋白表達(dá)的影響

武漢科技大學(xué)碩士學(xué)位論文10時(shí)，5-甲氧基黃酮對(duì)無義突變熒光素酶蛋白的表達(dá)恢復(fù)能力也同樣要優(yōu)于參照物G418。圖2藥物處理HEK293MUT細(xì)胞后熒光素酶蛋白表達(dá)恢復(fù)結(jié)果2.3不同濃度5-甲氧基黃酮對(duì)HT-29細(xì)胞無義突變APC基因蛋白表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，不同濃度5-甲氧基黃酮處理過后的HT-29細(xì)胞均表達(dá)APC蛋白，而且隨著濃度的升高，HT-29細(xì)胞APC蛋白表達(dá)也有所提升。這表明5-甲氧基黃酮對(duì)HT-29細(xì)胞無義突變APC基因蛋白表達(dá)恢復(fù)產(chǎn)生了影響。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，5-甲氧基黃酮對(duì)HCT-116細(xì)胞內(nèi)正常APC基因表達(dá)無明顯作用。圖3不同濃度5-甲氧基黃酮對(duì)HT-29細(xì)胞無義突變APC基因蛋白表達(dá)的影響


本文編號(hào)：3433639