發(fā)布時間：2021-10-12 07:22

　　惡性腫瘤是目前影響人類健康的最主要疾病之一,由于腫瘤發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜性,單一治療方法往往無法滿足治療需求,多種策略聯(lián)合治療則應(yīng)運而生。近年來,化學(xué)基因聯(lián)合治療成為新的研究熱點�；瘜W(xué)基因聯(lián)合治療可聯(lián)合不同治療機制,具有增強腫瘤治療效果,降低化療藥物的給藥劑量,降低毒副作用等優(yōu)勢。然而,由于化療藥物與基因藥物理化性質(zhì)的差異,構(gòu)建適宜的共遞送系統(tǒng)成為兩者聯(lián)合應(yīng)用的重要挑戰(zhàn)之一。有效的共遞送載體需要具備化療藥物和基因藥物的共裝載能力,并且根據(jù)聯(lián)合治療的需求將化療藥物與基因藥物分別靶向遞送至各自靶細(xì)胞內(nèi),從而發(fā)揮最優(yōu)的聯(lián)合治療效果。核殼結(jié)構(gòu)的納米載體具有較強的結(jié)構(gòu)層次性和可控釋藥特性,在化療與基因藥物共遞送載體的研究中顯示出巨大的發(fā)展?jié)摿蛻?yīng)用前景。為滿足化學(xué)基因聯(lián)合治療的不同給藥需求,本課題構(gòu)建兩種核殼結(jié)構(gòu)的納米載體,采用不同的藥物裝載方式以實現(xiàn)化療藥物與基因的同一靶細(xì)胞共遞送（腫瘤細(xì)胞）和異靶細(xì)胞逐級遞送（腫瘤細(xì)胞和M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞）,從而促進了協(xié)同治療效果的發(fā)揮。腫瘤細(xì)胞共遞送載體具備腫瘤微環(huán)境酶和pH雙重敏感的特征,有利于提高腫瘤細(xì)胞共遞送靶向性,降低藥物的毒副作用�；蚺c化療藥物異... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：187 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號說明
前言
    一、腫瘤的化學(xué)基因聯(lián)合治療
        1. 腫瘤的化學(xué)治療
        2. 腫瘤的基因治療
        3. 腫瘤的化學(xué)基因聯(lián)合治療
    二、化療藥物與基因共遞送納米載體
        1. 聚合物復(fù)合物
        2. 脂質(zhì)體
        3. 膠束
        4. 樹枝狀體
        5. 無機納米粒
    三、核殼結(jié)構(gòu)的共遞送納米載體
    四、課題設(shè)計
第一部分 雙敏感靶向核殼結(jié)構(gòu)納米載體共遞送多柔比星與質(zhì)粒DNA至腫瘤細(xì)胞的研究
    第一章 新型載藥材料的合成及性質(zhì)評價
        一、實驗材料
            1. 試劑與藥品
            2. 儀器設(shè)備
            3. 細(xì)胞培養(yǎng)
            4. 溶液的配制
                4.1 0.1 M磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 7.4)
                4.2 0.1 M磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 6.5)
                4.3 0.1 M磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 5.0)
                4.4 連接緩沖液(pH 6.0)
        二、實驗方法
            1. 材料合成
                1.1 HP的合成
                1.2 DHP的合成
            2. DOX含量測定方法建立
            3. DHP中DOX載藥量測定
            4. pH敏感的DOX釋放實驗
            5. 體外細(xì)胞毒性
        三、實驗結(jié)果
            1. 材料合成
                1.1 HP的合成
                1.2 DHP的合成
            2. DOX含量測定方法建立
            3. DHP中DOX載藥量測定
            4. pH敏感的DOX釋放實驗
            5. 體外細(xì)胞毒性
        四、討論
        五、本章小結(jié)
    第二章 雙敏感靶向共遞送核殼結(jié)構(gòu)納米載體的構(gòu)建及初步評價
        一、實驗材料
            1. 試劑與藥品
            2. 儀器設(shè)備
            3. 細(xì)胞培養(yǎng)
            4. 質(zhì)粒的抽提
            5. 細(xì)菌的培養(yǎng)
            6. 溶液配制
        二、實驗方法
            1. DDN的制備
            2. DDN中DHP與DNA質(zhì)量比的考察
            3. DDN體外轉(zhuǎn)染實驗
            4. DDN最優(yōu)處方的理化性質(zhì)考察
            5. HDDN 的制備
            6. HDDN中HA與DNA質(zhì)量比的考察
            7. HDDN最優(yōu)處方的理化性質(zhì)考察
            8. 肝素提取實驗
            9. 抗核酸酶穩(wěn)定性考察
            10. 血漿穩(wěn)定性考察
            11. 透明質(zhì)酸酶敏感性考察
        三. 實驗結(jié)果
            1. DDN的制備
            2. DDN體外轉(zhuǎn)染實驗
            3. DDN最優(yōu)處方的理化性質(zhì)考察
            4. HDDN的制備
            5. HDDN最優(yōu)處方的理化性質(zhì)考察
            6. 肝素提取實驗
            7. 抗核酸酶穩(wěn)定性考察
            8. 血漿穩(wěn)定性考察
            9. 透明質(zhì)酸酶敏感性考察
        四、討論
        五、本章小結(jié)
    第三章 雙敏感靶向共遞送核殼結(jié)構(gòu)納米載體的體外評價
        一、實驗材料
            1. 試劑與藥品
            2. 儀器設(shè)備
            3. 細(xì)胞
            4. 溶液配制
        二、實驗方法
            1. 細(xì)胞表面CD44受體表達(dá)
            2. 細(xì)胞毒性實驗
            3. 體外轉(zhuǎn)染實驗
            4. 細(xì)胞攝取實驗
            5. 內(nèi)吞抑制實驗
            6. CD44受體介導(dǎo)入胞機制實驗
            7. 體外共遞送實驗
        三、實驗結(jié)果
            1. 細(xì)胞表面CD44受體表達(dá)
            2. 細(xì)胞毒性實驗
            3. 體外轉(zhuǎn)染實驗
            4. 細(xì)胞攝取實驗
            5. 內(nèi)吞抑制實驗
            6. CD44受體介導(dǎo)入胞機制實驗
            7. 體外共遞送實驗
        四、討論
        五、本章小結(jié)
    第一部分 小結(jié)
第二部分 異靶點逐級靶向核殼結(jié)構(gòu)納米載體共遞送多柔比星與siRNA用于化學(xué)免疫聯(lián)合治療的研究
    第四章 新型靶向載藥材料的合成與評價
        一、實驗材料
            1. 試劑與藥品
            2. 儀器設(shè)備
            3. 溶液的配制
                3.1 0.5 M NaOH溶液
                3.2 0.5 M HCl溶液
                3.3 1.0 M NaOH溶液
                3.4 0.1 M HCl溶液
        二、實驗方法
            1. CPN的合成
            2. CAD的合成
            3. CDPN的合成
            4. MPEI的合成
            5. DOX含量測定方法的建立
            6. CDPN中DOX載藥量測定
            7. CDPN等電點的測定
        三、實驗結(jié)果
            1. CPN的合成
            2. CAD的合成
            3. CDPN的合成
            4. MPEI的合成
            5. DOX含量測定方法的建立
            6. CDPN中DOX載藥量測定
            7. CDPN等電點的測定
        四、討論
        五、本章小結(jié)
    第五章 異靶點逐級靶向核殼結(jié)構(gòu)納米載體的構(gòu)建及評價
        一、實驗材料
            1. 試劑與藥品
            2. 儀器設(shè)備
            3. 溶液配制
                3.1 0.1 M磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 7.4)
                3.2 0.1 M磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 6.5)
                3.3 0.1 M磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 5.0)
        二、實驗方法
            1. MPR的制備
            2. MPEI與siRNA質(zhì)量比的考察
                2.1 瓊脂糖凝膠的制備
                2.2 凝膠電泳阻滯實驗
                2.3 不同質(zhì)量比MPR的理化性質(zhì)考察
            3. MPR最優(yōu)處方的理化性質(zhì)
            4. CDMPR的制備
            5. CDPN與siRNA質(zhì)量比的考察
                5.1 凝膠電泳阻滯實驗
                5.2 不同質(zhì)量比CDMPR的理化性質(zhì)考察
            6. CDMPR最優(yōu)處方的理化性質(zhì)考察
            7. 電荷翻轉(zhuǎn)實驗
            8. 肝素提取實驗
            9. 抗核酸酶穩(wěn)定性考察
            10. 血漿穩(wěn)定性考察
            11. 不同pH值PBS中DOX含量測定方法的建立
            12. 不同pH值PBS中siRNA含量測定方法的建立
            13. 體外釋放實驗
        三. 實驗結(jié)果
            1. MPR的制備
            2. CDMPR的制備
            3. MPR與CDMPR最優(yōu)處方的理化性質(zhì)表征
            4. 電荷翻轉(zhuǎn)實驗
            5. 抗核酸酶穩(wěn)定性考察
            6. 血漿穩(wěn)定性考察
            7. DOX含量測定方法的建立
            8. siRNA含量測定方法的建立
            9. 體外釋放實驗
        四、討論
        五、本章小結(jié)
    第六章 異靶點逐級靶向核殼結(jié)構(gòu)納米載體的體外評價
        一、實驗材料
            1. 試劑與藥品
            2. 儀器設(shè)備
            3. 細(xì)胞
            4. 溶液配制
                4.1 0.1 M磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 7.4)
                4.2 0.1 M磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 6.5)
                4.3 細(xì)胞實驗用磷酸鹽緩沖液(PBS,pH=7.4,0.01 M)
                4.4 10× SDS-PAGE電泳緩沖液
                4.5 5%濃縮膠
                4.5 8%分離膠
                4.6 10×轉(zhuǎn)膜緩沖液
                4.7 10×TBS緩沖液
                4.8 TBST緩沖液
                4.9 封閉液
        二、實驗方法
            1. 體外攝取實驗
                1.1 MPR攝取實驗
                1.2 CDMPR的pH敏感攝取實驗
            2. 異靶點靶向攝取實驗
            3. 體外藥效實驗
            4. IKK β表達(dá)檢測
            5. 巨噬細(xì)胞極化實驗
        三、實驗結(jié)果
            1. 體外攝取實驗
            2. 異靶點靶向?qū)嶒?br>            3. 體外細(xì)胞毒性實驗
            4. IKKβ表達(dá)檢測
            5. 巨噬細(xì)胞極化實驗
        四、討論
        五、本章小結(jié)
    第七章 異靶點逐級靶向核殼結(jié)構(gòu)納米載體的體內(nèi)評價
        一、實驗材料
            1. 試劑與藥品
            2. 儀器設(shè)備
            3. 細(xì)胞與動物
        二、實驗方法
            1. 腫瘤組織藥物分布實驗
            2. 小鼠活體成像實驗
            3. 體內(nèi)藥效實驗
            4. 腫瘤組織HE染色、Ki67染色及TUNEL染色
            5. 體內(nèi)巨噬細(xì)胞極化實驗
            6. 細(xì)胞因子檢測
            7. 初步安全性評價
        三、實驗結(jié)果
            1. 腫瘤組織藥物分布實驗
            2. 小鼠活體成像實驗
            3. 體內(nèi)藥效實驗
            4. 腫瘤組織HE染色、Ki67染色及TUNEL染色
            5. 體內(nèi)巨噬細(xì)胞極化實驗
            6. 細(xì)胞因子檢測
            7. 初步安全性評價
        四、討論
        五、本章小結(jié)
    第二部分 小結(jié)
全文總結(jié)與展望
    一、全文總結(jié)
    二、創(chuàng)新點
    三、展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cancer statistics: updated cancer burden in China[J]. Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[2]透明質(zhì)酸在腫瘤治療中的應(yīng)用[J]. 王天琪,張娜.  生命的化學(xué). 2014(05)



本文編號：3432129