發(fā)布時間：2021-10-11 20:48

　　外消旋體托伐普坦是治療重度低鈉血癥和等容量性低鈉血癥的關(guān)鍵藥物,而光學(xué)純托伐普坦在動物體內(nèi)具備不同的藥代性能,目前尚未有微生物全細胞催化托伐普坦前手性酮（PK1）還原生成光學(xué)純托伐普坦的報道.擬建立微生物合成光學(xué)純托伐普坦的催化體系,對催化過程中所使用的菌種、有機溶劑進行選擇,并對有機相與水相比例、菌體濃度、底物濃度和轉(zhuǎn)化時間進行優(yōu)化.結(jié)果顯示:本試驗選取的5種酵母菌均可將PK1催化還原為S型為主的托伐普坦,選定其中具有較高轉(zhuǎn)化率和e.e.值的樹干畢赤酵母作為轉(zhuǎn)化菌株.從多種不同log P值的有機相中篩選出大豆油作為兩相催化系統(tǒng)的有機相.通過優(yōu)化發(fā)現(xiàn)兩相體系中大豆油與水相的體積比為1:9時為最佳油水比例.當菌體濃度為1.0 g/mL,底物濃度為10.0 mg/mL時轉(zhuǎn)化率顯著提高.同時,發(fā)現(xiàn)全細胞兩相催化體系中產(chǎn)物的積累與時間呈線性關(guān)系,并在72 h轉(zhuǎn)化率達到最大值.在以上最佳催化條件下全細胞的轉(zhuǎn)化率可達74.5%,產(chǎn)物e.e.為99.0%.本研究建立的大豆油-水的兩相催化體系是一種還原催化難溶性前手性酮底物生成光學(xué)純手性醇類化合物的有效方法.（圖7表2參24） 

【文章來源】：應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2020,26(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株
        1.1.2 試劑
        1.1.3 培養(yǎng)基
        1.1.4 緩沖液
    1.2 儀器
    1.3 方法
        1.3.1 種子液的制備
        1.3.2用于全細胞轉(zhuǎn)化的菌體的制備
        1.3.3 不同菌種轉(zhuǎn)化PK1效果的考察
        1.3.4 兩相轉(zhuǎn)化體系中不同有機溶劑對轉(zhuǎn)化率的影響
        1.3.5 兩相轉(zhuǎn)化體系中油水比例對轉(zhuǎn)化率的影響
        1.3.6 菌體濃度、底物濃度、轉(zhuǎn)化時間對轉(zhuǎn)化率的影響
        1.3.7 HPLC分析方法
2 結(jié)果與分析
    2.1 不同菌種轉(zhuǎn)化托伐普坦中間體效果的考察
    2.2 兩相催化體系中有機溶劑的選擇
    2.3 油水比例對轉(zhuǎn)化率的影響
    2.4 兩相催化體系中菌體濃度和底物濃度對PK1轉(zhuǎn)化的影響
        2.4.1 菌體濃度對PK1轉(zhuǎn)化的影響
        2.4.2 底物濃度對轉(zhuǎn)化的影響
    2.5 轉(zhuǎn)化時間對全細胞轉(zhuǎn)化率的影響
    2.6 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的光學(xué)特性
3 討論與結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]一株高效不對稱還原產(chǎn)生（R）-苯基乙二醇的菌株篩選、鑒定及全細胞催化體系[J]. 裴朝紅,張紅蕾,張超,徐志棟,李瑋.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2018(02)
[2]解脂酵母羰基還原酶基因的克隆表達及酶學(xué)性質(zhì)[J]. 張紅蕾,裴朝紅,張超,韓孟楠,徐志棟,李瑋.  河北大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2018(02)
[3]食用植物油中轉(zhuǎn)基因成分檢測技術(shù)研究進展[J]. 李允靜,肖芳,邵林,武玉花,萬丹鳳,吳剛.  中國油料作物學(xué)報. 2017(05)
[4]醫(yī)藥化學(xué)品的綠色生物制造[J]. 張志鈞,郁惠蕾,許建和.  生物產(chǎn)業(yè)技術(shù). 2016(05)
[5]馬克斯克魯維酵母羰基還原酶基因的克隆與表達[J]. 應(yīng)國清,楊岳微,梅建鳳,易喻,金志華.  微生物學(xué)通報. 2013(08)

博士論文
[1]羰基還原酶的挖掘和改造[D]. 李愛朋.浙江大學(xué) 2016

碩士論文
[1]托伐普坦片的制備工藝和質(zhì)量研究[D]. 崔瑩.天津大學(xué) 2016



本文編號：3431217