外消旋體托伐普坦是治療重度低鈉血癥和等容量性低鈉血癥的關鍵藥物,而光學純托伐普坦在動物體內具備不同的藥代性能,目前尚未有微生物全細胞催化托伐普坦前手性酮（PK1）還原生成光學純托伐普坦的報道.擬建立微生物合成光學純托伐普坦的催化體系,對催化過程中所使用的菌種、有機溶劑進行選擇,并對有機相與水相比例、菌體濃度、底物濃度和轉化時間進行優(yōu)化.結果顯示:本試驗選取的5種酵母菌均可將PK1催化還原為S型為主的托伐普坦,選定其中具有較高轉化率和e.e.值的樹干畢赤酵母作為轉化菌株.從多種不同log P值的有機相中篩選出大豆油作為兩相催化系統(tǒng)的有機相.通過優(yōu)化發(fā)現(xiàn)兩相體系中大豆油與水相的體積比為1:9時為最佳油水比例.當菌體濃度為1.0 g/mL,底物濃度為10.0 mg/mL時轉化率顯著提高.同時,發(fā)現(xiàn)全細胞兩相催化體系中產物的積累與時間呈線性關系,并在72 h轉化率達到最大值.在以上最佳催化條件下全細胞的轉化率可達74.5%,產物e.e.為99.0%.本研究建立的大豆油-水的兩相催化體系是一種還原催化難溶性前手性酮底物生成光學純手性醇類化合物的有效方法.（圖7表2參24） 

【文章來源】：應用與環(huán)境生物學報. 2020,26(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株
        1.1.2 試劑
        1.1.3 培養(yǎng)基
        1.1.4 緩沖液
    1.2 儀器
    1.3 方法
        1.3.1 種子液的制備
        1.3.2用于全細胞轉化的菌體的制備
        1.3.3 不同菌種轉化PK1效果的考察
        1.3.4 兩相轉化體系中不同有機溶劑對轉化率的影響
        1.3.5 兩相轉化體系中油水比例對轉化率的影響
        1.3.6 菌體濃度、底物濃度、轉化時間對轉化率的影響
        1.3.7 HPLC分析方法
2 結果與分析
    2.1 不同菌種轉化托伐普坦中間體效果的考察
    2.2 兩相催化體系中有機溶劑的選擇
    2.3 油水比例對轉化率的影響
    2.4 兩相催化體系中菌體濃度和底物濃度對PK1轉化的影響
        2.4.1 菌體濃度對PK1轉化的影響
        2.4.2 底物濃度對轉化的影響
    2.5 轉化時間對全細胞轉化率的影響
    2.6 轉化產物的光學特性
3 討論與結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]一株高效不對稱還原產生（R）-苯基乙二醇的菌株篩選、鑒定及全細胞催化體系[J]. 裴朝紅,張紅蕾,張超,徐志棟,李瑋.  應用與環(huán)境生物學報. 2018(02)
[2]解脂酵母羰基還原酶基因的克隆表達及酶學性質[J]. 張紅蕾,裴朝紅,張超,韓孟楠,徐志棟,李瑋.  河北大學學報(自然科學版). 2018(02)
[3]食用植物油中轉基因成分檢測技術研究進展[J]. 李允靜,肖芳,邵林,武玉花,萬丹鳳,吳剛.  中國油料作物學報. 2017(05)
[4]醫(yī)藥化學品的綠色生物制造[J]. 張志鈞,郁惠蕾,許建和.  生物產業(yè)技術. 2016(05)
[5]馬克斯克魯維酵母羰基還原酶基因的克隆與表達[J]. 應國清,楊岳微,梅建鳳,易喻,金志華.  微生物學通報. 2013(08)

博士論文
[1]羰基還原酶的挖掘和改造[D]. 李愛朋.浙江大學 2016

碩士論文
[1]托伐普坦片的制備工藝和質量研究[D]. 崔瑩.天津大學 2016



本文編號：3431217