目的:羊毛固醇合成酶抑制劑（RO 48–8071,RO）處理皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞（KCs）,探討RO對(duì)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞增殖、分化和凋亡的影響,并初步探討可能的分子機(jī)制,為闡明甲羥戊酸途徑在皮膚生長(zhǎng)發(fā)育及皮膚疾病中的作用奠定基礎(chǔ)。方法:（1）取外科手術(shù)正常皮膚組織,培養(yǎng)人的原代皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞（KCs）;（2）以不同濃度的RO（0,0.1,0.3,1.0,3.0,10.0,30.0,100.0μM）處理KCs 72 h,篩選有效RO濃度。（3）RO調(diào)控KCs增殖分析:以有效濃度的RO（10.0μM）或聯(lián)合下游產(chǎn)物膽固醇（CH,40μM）作用于KCs（24h,48h和72h）,MTS法分析上述處理對(duì)細(xì)胞增殖的影響,流式細(xì)胞術(shù)分析其對(duì)KCs細(xì)胞周期的影響;提取細(xì)胞總蛋白,Western Blot法分析細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CyclinB1及CyclinE表達(dá)變化。（4）RO對(duì)Ca²⁺誘導(dǎo)的KCs分化標(biāo)志蛋白表達(dá)的影響:RO（10.0μM）單獨(dú)或聯(lián)合CH（40μM）作用于KCs 24h,48h和72h后,加入Ca²⁺（1.8mM）處理24 h,Western ... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度羊毛固醇合成酶抑制劑RO對(duì)KCs細(xì)胞增殖的影響（*p<0.05）

用 RO（10μM）單獨(dú)或聯(lián)合 CH（40μM）處理 KCs 24h，48h 和 72h 后，對(duì)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖抑制率分別約為 10%、40% 和 65%，與對(duì)照組相比RO顯著抑制KCs的增殖（p<0.05），表現(xiàn)出時(shí)間依賴效應(yīng)（圖2）。3.2.3 CH 部分補(bǔ)救 RO 對(duì) KCs 的增殖抑制作用LSS 是膽固醇合成途徑下游的重要的關(guān)鍵酶，因此當(dāng) RO 抑制該酶活性后，導(dǎo)致下游產(chǎn)物不足，尤其是終產(chǎn)物 CH，而 CH 是細(xì)胞的基本組成成分之一，也參與許多細(xì)胞生理功能。為了探討 RO 抑制 KCs 增殖是否與 CH 的缺乏有關(guān)，與RO 聯(lián)合使用 40μM CH共同處理 KCs，從圖2中可以看到

期細(xì)胞比例與 RO 單獨(dú)處理72h（83.16%）相比顯著性下降，而 S 期細(xì)胞比例顯著上升（9.11%）。圖3 單獨(dú)使用抑制劑 RO 和使用抑制劑 RO 并添加下游產(chǎn)物膽固醇（CH）對(duì) KCs細(xì)胞周期的影響（* p <0.05）Figure 3 The effect of RO alone and RO combined with downstream cholesterol (CH)on the cell cycle of KCs (*p <0.05)


本文編號(hào)：3427110