發(fā)布時間：2021-10-09 12:47

　　目的:本題基于藥效團(tuán)拼合原理,設(shè)計、合成含三甲氧基苯基的黃酮水楊酸甲酯衍生物,初步探究其抗腫瘤活性及作用機(jī)制,期望篩選出同時對腫瘤的血管生長和糖酵解水平均有抑制作用的優(yōu)良抗腫瘤先導(dǎo)化合物。方法:以3,4,5-三甲氧基苯酚為起始原料,合成得到5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮,再分別通過1,2-二溴乙烷、1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷連接系列水楊酸甲酯衍生物,所得產(chǎn)物通過硅膠柱層析法進(jìn)行純化,最終得到24個新型目標(biāo)化合物,通過熔點測定（M.P.）、核磁共振氫譜（¹ H NMR）、碳譜（¹33 C NMR）和質(zhì)譜（MS）等手段進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確認(rèn)。采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色法測定24個目標(biāo)化合物對人胃癌細(xì)胞（SGC-7901、MGC-803、HGC-27）、人結(jié)腸癌細(xì)胞（HCT-116）、人肝癌細(xì)胞（BEL-7402）的抗增殖活性以及對正常的人胃粘膜細(xì)胞（GES-1）的細(xì)胞毒性,比較初步的MTT測定實驗結(jié)果,篩選出目標(biāo)化合物7f對人胃癌細(xì)胞（HGC-27）做進(jìn)一步的抗腫瘤活性及其作用機(jī)制研究。采用細(xì)胞集落實驗和劃痕實驗測定目標(biāo)化合物7f對H... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

微管蛋白自組裝過程示意圖

9取代基的水楊酸甲酯衍生物，期望篩選得到同時對腫瘤細(xì)胞血管與糖酵解水平均有抑制作用的優(yōu)良抗腫瘤先導(dǎo)化合物。如圖1.5通過拼合原理設(shè)計的目標(biāo)5,6,7-三甲氧基黃酮水楊酸甲酯衍生物。

343.4化合物7f對HGC-27細(xì)胞集落形成的影響腫瘤細(xì)胞通過自身無限增殖，獲得形成集落的能力，而高度分化成熟的細(xì)胞不具備這種增殖能力，因此，腫瘤細(xì)胞集落形成效率的差異反映著腫瘤細(xì)胞體外獨立生存能力的強弱。平板細(xì)胞克隆技術(shù)是檢測細(xì)胞增殖能力的有效方法之一，在本節(jié)中，采用此技術(shù)測定化合物7f對HGC-27細(xì)胞集落形成的影響。3.4.1平板細(xì)胞克隆實驗首先取HGC-27單細(xì)胞懸液以1500個細(xì)胞每孔的密度接種在6孔培養(yǎng)板中，加入適量新鮮培養(yǎng)液，然后在37℃，含5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育24h；更換含有不同濃度化合物7f（2、4、8μM）的新鮮培養(yǎng)液后，其中未加藥物僅含0.1%DMSO的新鮮培養(yǎng)液作為對照組。平均三天更換一次培養(yǎng)液，共同孵育9天后，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗滌兩次，形成的菌落用4%多聚甲醛（Paraformaldehyde，POM）固定15min，然后在室溫下用0.1%結(jié)晶紫染色15min，再次用PBS洗滌多次后，將平板中的菌落干燥并拍照。3.4.2化合物7f抑制HGC-27細(xì)胞集落的形成通過集落實驗成功測定了化合物7f對HGC-27細(xì)胞的增殖能力的影響，結(jié)果如圖3.1所示，加藥組中不同濃度的7f（2、4、8μM）與空白對照組相比較，發(fā)現(xiàn)隨著加藥濃度的不斷增加，培養(yǎng)皿中結(jié)晶紫的面積越來越少，并且顏色也逐漸變淺，甚至當(dāng)化合物7f加藥濃度為8μM時，結(jié)晶紫幾乎完全消失。結(jié)果表明化合物7f能夠以劑量依賴性方式顯著地抑制胃癌HGC-27細(xì)胞的體外生長。圖3.1化合物7f抑制HGC-27細(xì)胞的集落形成

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3426410