目的:本題基于藥效團拼合原理,設計、合成含三甲氧基苯基的黃酮水楊酸甲酯衍生物,初步探究其抗腫瘤活性及作用機制,期望篩選出同時對腫瘤的血管生長和糖酵解水平均有抑制作用的優(yōu)良抗腫瘤先導化合物。方法:以3,4,5-三甲氧基苯酚為起始原料,合成得到5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮,再分別通過1,2-二溴乙烷、1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷連接系列水楊酸甲酯衍生物,所得產物通過硅膠柱層析法進行純化,最終得到24個新型目標化合物,通過熔點測定（M.P.）、核磁共振氫譜（¹ H NMR）、碳譜（¹33 C NMR）和質譜（MS）等手段進行了結構確認。采用四甲基偶氮唑藍（MTT）比色法測定24個目標化合物對人胃癌細胞（SGC-7901、MGC-803、HGC-27）、人結腸癌細胞（HCT-116）、人肝癌細胞（BEL-7402）的抗增殖活性以及對正常的人胃粘膜細胞（GES-1）的細胞毒性,比較初步的MTT測定實驗結果,篩選出目標化合物7f對人胃癌細胞（HGC-27）做進一步的抗腫瘤活性及其作用機制研究。采用細胞集落實驗和劃痕實驗測定目標化合物7f對H... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數】：127 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

微管蛋白自組裝過程示意圖

9取代基的水楊酸甲酯衍生物，期望篩選得到同時對腫瘤細胞血管與糖酵解水平均有抑制作用的優(yōu)良抗腫瘤先導化合物。如圖1.5通過拼合原理設計的目標5,6,7-三甲氧基黃酮水楊酸甲酯衍生物。

343.4化合物7f對HGC-27細胞集落形成的影響腫瘤細胞通過自身無限增殖，獲得形成集落的能力，而高度分化成熟的細胞不具備這種增殖能力，因此，腫瘤細胞集落形成效率的差異反映著腫瘤細胞體外獨立生存能力的強弱。平板細胞克隆技術是檢測細胞增殖能力的有效方法之一，在本節(jié)中，采用此技術測定化合物7f對HGC-27細胞集落形成的影響。3.4.1平板細胞克隆實驗首先取HGC-27單細胞懸液以1500個細胞每孔的密度接種在6孔培養(yǎng)板中，加入適量新鮮培養(yǎng)液，然后在37℃，含5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育24h；更換含有不同濃度化合物7f（2、4、8μM）的新鮮培養(yǎng)液后，其中未加藥物僅含0.1%DMSO的新鮮培養(yǎng)液作為對照組。平均三天更換一次培養(yǎng)液，共同孵育9天后，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗滌兩次，形成的菌落用4%多聚甲醛（Paraformaldehyde，POM）固定15min，然后在室溫下用0.1%結晶紫染色15min，再次用PBS洗滌多次后，將平板中的菌落干燥并拍照。3.4.2化合物7f抑制HGC-27細胞集落的形成通過集落實驗成功測定了化合物7f對HGC-27細胞的增殖能力的影響，結果如圖3.1所示，加藥組中不同濃度的7f（2、4、8μM）與空白對照組相比較，發(fā)現隨著加藥濃度的不斷增加，培養(yǎng)皿中結晶紫的面積越來越少，并且顏色也逐漸變淺，甚至當化合物7f加藥濃度為8μM時，結晶紫幾乎完全消失。結果表明化合物7f能夠以劑量依賴性方式顯著地抑制胃癌HGC-27細胞的體外生長。圖3.1化合物7f抑制HGC-27細胞的集落形成

【參考文獻】：
期刊論文
[1]黃酮類化合物的研究進展[J]. 彭程程,王青山,趙國祥,鄧放明.  農產品加工(學刊). 2010(05)
[2]Mechanisms underlying aspirin-mediated growth inhibition and apoptosis induction of cyclooxygenase-2 negative colon cancer cell line SW480[J]. Ming-Yu Lai, Jie-An Huang,Zhi-Hai Liang, Hai-Xing Jiang, Guo-Du Tang,Department of Gastroenterology, First Affiliated Hospital, Guangxi Medical University,Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region,China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(26)
[3]黃酮類化合物抗腫瘤作用研究進展[J]. 黃華藝,查錫良.  中國新藥與臨床雜志. 2002(07)



本文編號：3426410