目的探討蛋白激酶C-θ（PKC-θ）在嗎啡誘導(dǎo)初始T細胞分化模型中的作用及潛在機制。方法取小鼠脾臟,制備單細胞懸液,使用分離試劑盒獲得初始T細胞。將提純的初始T細胞分為六組:對照組、嗎啡組、納洛酮（嗎啡拮抗劑）組、AEB071（PKC-θ抑制劑）組、嗎啡+納洛酮組和嗎啡+AEB071組。按組別加入不同刺激物培養(yǎng),收取細胞,采用流式細胞儀檢測Th1和Th2細胞數(shù)量,采用ELISA法檢測細胞因子IL-4和IFN-γ濃度,采用Western blot法檢測PKC-θS676、T538兩個位點的磷酸化水平,采用實時熒光定量PCR（qPCR）檢測GATA3 mRNA表達量,采用凝膠遷移實驗（EMSA）檢測GATA3轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果與對照組比較,嗎啡組Th2細胞數(shù)量明顯增多,IL-4濃度明顯升高,PKC-θS676、T538兩個位點的磷酸化水平明顯升高,GATA3 mRNA表達量及轉(zhuǎn)錄活性均明顯升高（P<0.01）。與嗎啡組比較,嗎啡+納洛酮組和嗎啡+AEB071組Th2細胞數(shù)量明顯減少,IL-4濃度明顯降低,PKC-θS676、T538兩個位點的磷酸化水平明顯降低,GATA3 mRNA表達量... 

【文章來源】：臨床麻醉學(xué)雜志. 2020,36(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

六組細胞GATA3轉(zhuǎn)錄活性的比較

與對照組比較,嗎啡組Th2細胞數(shù)量明顯增多(P<0.01)。與嗎啡組比較,嗎啡+納洛酮組和嗎啡+AEB071組Th2細胞數(shù)量明顯減少(P<0.01)。與納洛酮組比較,嗎啡+納洛酮組Th2細胞數(shù)量明顯增多(P<0.01)。與AEB071組比較,嗎啡+AEB071組Th2細胞數(shù)量明顯增多(P<0.01)。六組Th1細胞數(shù)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(圖1)。與對照組比較,嗎啡組細胞因子IL-4濃度明顯升高(P<0.01);與嗎啡組比較,嗎啡+納洛酮組和嗎啡+AEB071組細胞因子IL-4濃度明顯降低(P<0.01)。納洛酮組和嗎啡+納洛酮組細胞因子IL-4濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。AEB071組和嗎啡+AEB071組細胞因子IL-4濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。六組細胞因子IFN-γ濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(圖2—3)。

與對照組比較,嗎啡組細胞因子IL-4濃度明顯升高(P<0.01);與嗎啡組比較,嗎啡+納洛酮組和嗎啡+AEB071組細胞因子IL-4濃度明顯降低(P<0.01)。納洛酮組和嗎啡+納洛酮組細胞因子IL-4濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。AEB071組和嗎啡+AEB071組細胞因子IL-4濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。六組細胞因子IFN-γ濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(圖2—3)。圖3 六組細胞因子TNF-γ濃度的比較

【參考文獻】：
期刊論文
[1]AKT和PKCθ與嗎啡抑制輔助性T淋巴細胞分化的關(guān)系[J]. 毛毛,孫杰,錢燕寧.  中華麻醉學(xué)雜志. 2014 (02)



本文編號：3403707