體外微核高內(nèi)涵篩選法在食品毒理學(xué)遺傳毒性評(píng)價(jià)中應(yīng)用研究
發(fā)布時(shí)間：2021-08-30 17:08
目的探討基于高內(nèi)涵篩選（high-content screening, HCS）技術(shù)的體外微核（in vitro micronucleus, IVMN）檢測(cè)方法應(yīng)用于食品毒理學(xué)遺傳毒性評(píng)價(jià)的可行性。方法采用IVMN和HCS法,分別對(duì)10種化合物進(jìn)行遺傳毒性評(píng)價(jià),其中5種已知遺傳毒性化合物（染色體斷裂劑和非整倍體誘發(fā)劑）、1種已知非遺傳毒性化合物以及4種食品原料,每個(gè)受試物至少設(shè)置3個(gè)劑量組,每個(gè)劑量組設(shè)2個(gè)復(fù)孔,同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照組（無(wú)血清最小必需培養(yǎng)基）和陽(yáng)性對(duì)照組（+S9為環(huán)磷酰胺20μg/ml、-S9為絲裂霉素C 1.0μg/ml）。以中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞為細(xì)胞模型,在有和/或無(wú)代謝活化系統(tǒng)條件下,依次對(duì)上述受試物采用短時(shí)處理（4 h）后進(jìn)行微核檢測(cè),并分析微核細(xì)胞率。結(jié)果經(jīng)IVMN和HCS法得到的IVMN試驗(yàn)結(jié)果顯示:2.5～10μg/ml苯并芘[B（a）P]、5～20μg/ml甲磺酸甲酯（MMS）、0.01～0.04μg/ml 4-硝基喹啉-N-氧化物（4NQO）、0.25～1.0μg/ml秋水仙堿（COL）和0.5～2.0μg/ml硫酸長(zhǎng)春堿（VB）在各自濃度范圍內(nèi),在有或無(wú)代謝活...
【文章來(lái)源】：中國(guó)食品衛(wèi)生雜志. 2020,32(02)北大核心CSCD
【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)
【部分圖文】：
HCS微核成像分析軟件示意圖(40×)
每個(gè)劑量組對(duì)2 000個(gè)雙核細(xì)胞進(jìn)行人工鏡檢分析(圖1),IVMN法結(jié)果見(jiàn)表1。隨著受試物染毒濃度的增加,B(a)P、MMS、4NQO、COL、VB各劑量組的微核細(xì)胞率呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性增加;NaCl、食品原料A、食品原料B、食品原料C以及食品原料D各劑量組雖呈現(xiàn)一定的劑量依賴性增加趨勢(shì),但各組微核細(xì)胞率均維持在較低的水平。表1 IVMN和HCS法的檢測(cè)結(jié)果 ( x ˉ ±s) Table 1 Results of IVMN and HCS assay 組別 終濃度/(μg/ml) IVMN法 HCS法 細(xì)胞毒性 微核細(xì)胞率/% 微核細(xì)胞率倍數(shù) 微核細(xì)胞率/% 微核細(xì)胞率倍數(shù) +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 陰性對(duì)照組 — 0.0 0.0 1.0 1.1 — — 0.67±0.27 0.81±0.30 — — 陽(yáng)性對(duì)照組 — 49.0 44.5 10.4* 15.5* 10.4 14.1 8.85±0.40* 12.30±2.46* 13.21 15.19 B(a)P 2.5 8.5 — 2.7* — 2.7 — 1.79±0.71* — 2.99 — 5 27.6 — 4.1* — 4.1 — 3.91±0.55* — 5.84 — 10 52.8 — 6.9* — 6.9 — 4.42±0.62* — 7.36 — MMS 5 — 11.8 — 4.3* — 3.9 — 3.86±1.91* — 4.77 10 — 30.5 — 6.3* — 5.7 — 5.05±0.83* — 6.23 20 — 48.1 — 7.2* — 6.5 — 5.75±0.59* — 7.10 4NQO 0.01 — 10.4 — 3.2* — 2.9 — 2.47±1.06* — 3.05 0.02 — 19.2 — 4.8* — 4.4 — 4.90±0.74* — 6.05 0.04 — 44.5 — 6.2* — 5.6 — 5.35±1.07* — 6.60 COL 0.25 — 18.1 — 1.8 — 1.6 — 2.13±0.61* — 2.63 0.5 — 32.9 — 8.7* — 7.9 — 7.08±0.55* — 8.74 1.0 — 47.2 — 12.2* — 11.1 — 14.53±2.19* — 17.94 VB 0.5 — 14.9 — 5.3* — 4.8 — 4.55±0.44* — 5.62 1.0 — 38.2 — 9.5* — 8.6 — 7.07±0.75* — 8.73 2.0 — 56.5 — 9.2* — 8.4 — 7.32±0.27* — 9.04 NaCl 1 250 0.0 0.0 0.6 0.8 0.6 0.7 0.53±0.06 0.64±0.14 0.79 0.79 2 500 0.0 0.0 0.5 1.1 0.5 1.0 0.72±0.14 0.79±0.24 1.07 0.98 5 000 0.0 0.0 0.8 1.3 0.8 1.2 0.65±0.08 1.10±0.07 0.97 1.36 食品原料A 1 250 0.0 3.6 0.8 1.1 0.8 1.0 0.61±0.17 0.53±0.17 0.91 0.66 2 500 5.6 5.8 1.0 1.8 1.0 1.6 0.60±0.03 0.51±0.03 0.90 0.63 5 000 14.5 11.8 1.4 2.0 1.4 1.8 0.79±0.10 0.62±0.10 1.18 0.77 食品原料B 1 250 0.0 9.5 1.5 2.0 1.5 1.8 0.64±0.10 0.65±0.18 0.95 0.80 2500 5.4 15.7 1.7 1.8 1.7 1.6 0.55±0.18 1.01±0.40 0.82 1.25 5 000 20.0 15.9 1.9 2.1 1.9 1.9 0.91±0.25 0.92±0.18 1.36 1.14 食品原料C 312.5 0.0 2.5 1.3 1.3 1.3 1.2 0.71±0.27 0.67±0.07 1.06 0.83 625 11.5 28.5 1.6 1.5 1.6 1.4 1.06±0.11 1.18±0.42 1.58 1.46 1 250 48.6 54.8 1.5 1.8 1.5 1.6 0.92±0.16 1.29±0.11 1.37 1.59 食品原料D 156.25 0.0 8.4 0.7 1.0 0.7 0.9 0.53±0.14 0.79±0.33 0.79 0.98 312.5 8.4 12.3 1.4 1.2 1.4 1.1 0.66±0.07 0.87±0.24 0.99 1.07 625 45.8 53.7 1.5 1.9 1.5 1.7 0.85±0.13 1.23±0.37 1.27 1.52 注:*為與陰性對(duì)照組比較P<0.05;—為無(wú)終濃度或未檢測(cè)
表1 IVMN和HCS法的檢測(cè)結(jié)果 ( x ˉ ±s) Table 1 Results of IVMN and HCS assay 組別 終濃度/(μg/ml) IVMN法 HCS法 細(xì)胞毒性 微核細(xì)胞率/% 微核細(xì)胞率倍數(shù) 微核細(xì)胞率/% 微核細(xì)胞率倍數(shù) +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 陰性對(duì)照組 — 0.0 0.0 1.0 1.1 — — 0.67±0.27 0.81±0.30 — — 陽(yáng)性對(duì)照組 — 49.0 44.5 10.4* 15.5* 10.4 14.1 8.85±0.40* 12.30±2.46* 13.21 15.19 B(a)P 2.5 8.5 — 2.7* — 2.7 — 1.79±0.71* — 2.99 — 5 27.6 — 4.1* — 4.1 — 3.91±0.55* — 5.84 — 10 52.8 — 6.9* — 6.9 — 4.42±0.62* — 7.36 — MMS 5 — 11.8 — 4.3* — 3.9 — 3.86±1.91* — 4.77 10 — 30.5 — 6.3* — 5.7 — 5.05±0.83* — 6.23 20 — 48.1 — 7.2* — 6.5 — 5.75±0.59* — 7.10 4NQO 0.01 — 10.4 — 3.2* — 2.9 — 2.47±1.06* — 3.05 0.02 — 19.2 — 4.8* — 4.4 — 4.90±0.74* — 6.05 0.04 — 44.5 — 6.2* — 5.6 — 5.35±1.07* — 6.60 COL 0.25 — 18.1 — 1.8 — 1.6 — 2.13±0.61* — 2.63 0.5 — 32.9 — 8.7* — 7.9 — 7.08±0.55* — 8.74 1.0 — 47.2 — 12.2* — 11.1 — 14.53±2.19* — 17.94 VB 0.5 — 14.9 — 5.3* — 4.8 — 4.55±0.44* — 5.62 1.0 — 38.2 — 9.5* — 8.6 — 7.07±0.75* — 8.73 2.0 — 56.5 — 9.2* — 8.4 — 7.32±0.27* — 9.04 NaCl 1 250 0.0 0.0 0.6 0.8 0.6 0.7 0.53±0.06 0.64±0.14 0.79 0.79 2 500 0.0 0.0 0.5 1.1 0.5 1.0 0.72±0.14 0.79±0.24 1.07 0.98 5 000 0.0 0.0 0.8 1.3 0.8 1.2 0.65±0.08 1.10±0.07 0.97 1.36 食品原料A 1 250 0.0 3.6 0.8 1.1 0.8 1.0 0.61±0.17 0.53±0.17 0.91 0.66 2 500 5.6 5.8 1.0 1.8 1.0 1.6 0.60±0.03 0.51±0.03 0.90 0.63 5 000 14.5 11.8 1.4 2.0 1.4 1.8 0.79±0.10 0.62±0.10 1.18 0.77 食品原料B 1 250 0.0 9.5 1.5 2.0 1.5 1.8 0.64±0.10 0.65±0.18 0.95 0.80 2500 5.4 15.7 1.7 1.8 1.7 1.6 0.55±0.18 1.01±0.40 0.82 1.25 5 000 20.0 15.9 1.9 2.1 1.9 1.9 0.91±0.25 0.92±0.18 1.36 1.14 食品原料C 312.5 0.0 2.5 1.3 1.3 1.3 1.2 0.71±0.27 0.67±0.07 1.06 0.83 625 11.5 28.5 1.6 1.5 1.6 1.4 1.06±0.11 1.18±0.42 1.58 1.46 1 250 48.6 54.8 1.5 1.8 1.5 1.6 0.92±0.16 1.29±0.11 1.37 1.59 食品原料D 156.25 0.0 8.4 0.7 1.0 0.7 0.9 0.53±0.14 0.79±0.33 0.79 0.98 312.5 8.4 12.3 1.4 1.2 1.4 1.1 0.66±0.07 0.87±0.24 0.99 1.07 625 45.8 53.7 1.5 1.9 1.5 1.7 0.85±0.13 1.23±0.37 1.27 1.52 注:*為與陰性對(duì)照組比較P<0.05;—為無(wú)終濃度或未檢測(cè)2.3 HCS法檢測(cè)結(jié)果
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]微核試驗(yàn)方法及應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 陳思,魯克慶,馬興銘. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2016(02)
[2]CHO細(xì)胞體外微核高內(nèi)涵篩選方法的建立及應(yīng)用[J]. 周飛,林海霞,常艷. 癌變·畸變·突變. 2011(01)
本文編號(hào)：3373177
【文章來(lái)源】：中國(guó)食品衛(wèi)生雜志. 2020,32(02)北大核心CSCD
【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)
【部分圖文】：
HCS微核成像分析軟件示意圖(40×)
每個(gè)劑量組對(duì)2 000個(gè)雙核細(xì)胞進(jìn)行人工鏡檢分析(圖1),IVMN法結(jié)果見(jiàn)表1。隨著受試物染毒濃度的增加,B(a)P、MMS、4NQO、COL、VB各劑量組的微核細(xì)胞率呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性增加;NaCl、食品原料A、食品原料B、食品原料C以及食品原料D各劑量組雖呈現(xiàn)一定的劑量依賴性增加趨勢(shì),但各組微核細(xì)胞率均維持在較低的水平。表1 IVMN和HCS法的檢測(cè)結(jié)果 ( x ˉ ±s) Table 1 Results of IVMN and HCS assay 組別 終濃度/(μg/ml) IVMN法 HCS法 細(xì)胞毒性 微核細(xì)胞率/% 微核細(xì)胞率倍數(shù) 微核細(xì)胞率/% 微核細(xì)胞率倍數(shù) +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 陰性對(duì)照組 — 0.0 0.0 1.0 1.1 — — 0.67±0.27 0.81±0.30 — — 陽(yáng)性對(duì)照組 — 49.0 44.5 10.4* 15.5* 10.4 14.1 8.85±0.40* 12.30±2.46* 13.21 15.19 B(a)P 2.5 8.5 — 2.7* — 2.7 — 1.79±0.71* — 2.99 — 5 27.6 — 4.1* — 4.1 — 3.91±0.55* — 5.84 — 10 52.8 — 6.9* — 6.9 — 4.42±0.62* — 7.36 — MMS 5 — 11.8 — 4.3* — 3.9 — 3.86±1.91* — 4.77 10 — 30.5 — 6.3* — 5.7 — 5.05±0.83* — 6.23 20 — 48.1 — 7.2* — 6.5 — 5.75±0.59* — 7.10 4NQO 0.01 — 10.4 — 3.2* — 2.9 — 2.47±1.06* — 3.05 0.02 — 19.2 — 4.8* — 4.4 — 4.90±0.74* — 6.05 0.04 — 44.5 — 6.2* — 5.6 — 5.35±1.07* — 6.60 COL 0.25 — 18.1 — 1.8 — 1.6 — 2.13±0.61* — 2.63 0.5 — 32.9 — 8.7* — 7.9 — 7.08±0.55* — 8.74 1.0 — 47.2 — 12.2* — 11.1 — 14.53±2.19* — 17.94 VB 0.5 — 14.9 — 5.3* — 4.8 — 4.55±0.44* — 5.62 1.0 — 38.2 — 9.5* — 8.6 — 7.07±0.75* — 8.73 2.0 — 56.5 — 9.2* — 8.4 — 7.32±0.27* — 9.04 NaCl 1 250 0.0 0.0 0.6 0.8 0.6 0.7 0.53±0.06 0.64±0.14 0.79 0.79 2 500 0.0 0.0 0.5 1.1 0.5 1.0 0.72±0.14 0.79±0.24 1.07 0.98 5 000 0.0 0.0 0.8 1.3 0.8 1.2 0.65±0.08 1.10±0.07 0.97 1.36 食品原料A 1 250 0.0 3.6 0.8 1.1 0.8 1.0 0.61±0.17 0.53±0.17 0.91 0.66 2 500 5.6 5.8 1.0 1.8 1.0 1.6 0.60±0.03 0.51±0.03 0.90 0.63 5 000 14.5 11.8 1.4 2.0 1.4 1.8 0.79±0.10 0.62±0.10 1.18 0.77 食品原料B 1 250 0.0 9.5 1.5 2.0 1.5 1.8 0.64±0.10 0.65±0.18 0.95 0.80 2500 5.4 15.7 1.7 1.8 1.7 1.6 0.55±0.18 1.01±0.40 0.82 1.25 5 000 20.0 15.9 1.9 2.1 1.9 1.9 0.91±0.25 0.92±0.18 1.36 1.14 食品原料C 312.5 0.0 2.5 1.3 1.3 1.3 1.2 0.71±0.27 0.67±0.07 1.06 0.83 625 11.5 28.5 1.6 1.5 1.6 1.4 1.06±0.11 1.18±0.42 1.58 1.46 1 250 48.6 54.8 1.5 1.8 1.5 1.6 0.92±0.16 1.29±0.11 1.37 1.59 食品原料D 156.25 0.0 8.4 0.7 1.0 0.7 0.9 0.53±0.14 0.79±0.33 0.79 0.98 312.5 8.4 12.3 1.4 1.2 1.4 1.1 0.66±0.07 0.87±0.24 0.99 1.07 625 45.8 53.7 1.5 1.9 1.5 1.7 0.85±0.13 1.23±0.37 1.27 1.52 注:*為與陰性對(duì)照組比較P<0.05;—為無(wú)終濃度或未檢測(cè)
表1 IVMN和HCS法的檢測(cè)結(jié)果 ( x ˉ ±s) Table 1 Results of IVMN and HCS assay 組別 終濃度/(μg/ml) IVMN法 HCS法 細(xì)胞毒性 微核細(xì)胞率/% 微核細(xì)胞率倍數(shù) 微核細(xì)胞率/% 微核細(xì)胞率倍數(shù) +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 陰性對(duì)照組 — 0.0 0.0 1.0 1.1 — — 0.67±0.27 0.81±0.30 — — 陽(yáng)性對(duì)照組 — 49.0 44.5 10.4* 15.5* 10.4 14.1 8.85±0.40* 12.30±2.46* 13.21 15.19 B(a)P 2.5 8.5 — 2.7* — 2.7 — 1.79±0.71* — 2.99 — 5 27.6 — 4.1* — 4.1 — 3.91±0.55* — 5.84 — 10 52.8 — 6.9* — 6.9 — 4.42±0.62* — 7.36 — MMS 5 — 11.8 — 4.3* — 3.9 — 3.86±1.91* — 4.77 10 — 30.5 — 6.3* — 5.7 — 5.05±0.83* — 6.23 20 — 48.1 — 7.2* — 6.5 — 5.75±0.59* — 7.10 4NQO 0.01 — 10.4 — 3.2* — 2.9 — 2.47±1.06* — 3.05 0.02 — 19.2 — 4.8* — 4.4 — 4.90±0.74* — 6.05 0.04 — 44.5 — 6.2* — 5.6 — 5.35±1.07* — 6.60 COL 0.25 — 18.1 — 1.8 — 1.6 — 2.13±0.61* — 2.63 0.5 — 32.9 — 8.7* — 7.9 — 7.08±0.55* — 8.74 1.0 — 47.2 — 12.2* — 11.1 — 14.53±2.19* — 17.94 VB 0.5 — 14.9 — 5.3* — 4.8 — 4.55±0.44* — 5.62 1.0 — 38.2 — 9.5* — 8.6 — 7.07±0.75* — 8.73 2.0 — 56.5 — 9.2* — 8.4 — 7.32±0.27* — 9.04 NaCl 1 250 0.0 0.0 0.6 0.8 0.6 0.7 0.53±0.06 0.64±0.14 0.79 0.79 2 500 0.0 0.0 0.5 1.1 0.5 1.0 0.72±0.14 0.79±0.24 1.07 0.98 5 000 0.0 0.0 0.8 1.3 0.8 1.2 0.65±0.08 1.10±0.07 0.97 1.36 食品原料A 1 250 0.0 3.6 0.8 1.1 0.8 1.0 0.61±0.17 0.53±0.17 0.91 0.66 2 500 5.6 5.8 1.0 1.8 1.0 1.6 0.60±0.03 0.51±0.03 0.90 0.63 5 000 14.5 11.8 1.4 2.0 1.4 1.8 0.79±0.10 0.62±0.10 1.18 0.77 食品原料B 1 250 0.0 9.5 1.5 2.0 1.5 1.8 0.64±0.10 0.65±0.18 0.95 0.80 2500 5.4 15.7 1.7 1.8 1.7 1.6 0.55±0.18 1.01±0.40 0.82 1.25 5 000 20.0 15.9 1.9 2.1 1.9 1.9 0.91±0.25 0.92±0.18 1.36 1.14 食品原料C 312.5 0.0 2.5 1.3 1.3 1.3 1.2 0.71±0.27 0.67±0.07 1.06 0.83 625 11.5 28.5 1.6 1.5 1.6 1.4 1.06±0.11 1.18±0.42 1.58 1.46 1 250 48.6 54.8 1.5 1.8 1.5 1.6 0.92±0.16 1.29±0.11 1.37 1.59 食品原料D 156.25 0.0 8.4 0.7 1.0 0.7 0.9 0.53±0.14 0.79±0.33 0.79 0.98 312.5 8.4 12.3 1.4 1.2 1.4 1.1 0.66±0.07 0.87±0.24 0.99 1.07 625 45.8 53.7 1.5 1.9 1.5 1.7 0.85±0.13 1.23±0.37 1.27 1.52 注:*為與陰性對(duì)照組比較P<0.05;—為無(wú)終濃度或未檢測(cè)2.3 HCS法檢測(cè)結(jié)果
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]微核試驗(yàn)方法及應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 陳思,魯克慶,馬興銘. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2016(02)
[2]CHO細(xì)胞體外微核高內(nèi)涵篩選方法的建立及應(yīng)用[J]. 周飛,林海霞,常艷. 癌變·畸變·突變. 2011(01)
本文編號(hào)：3373177
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/3373177.html
最近更新
教材專(zhuān)著
