目的:目前我國的器官移植數(shù)量位居世界第二,環(huán)孢素（Cyclosporine A,CsA）在器官移植領(lǐng)域中是最常用的免疫抑制劑之一。如何提高患者的生存率和移植物的存活率、減少肝損傷發(fā)生率、提高該藥臨床應(yīng)用安全性,避免有害的相互作用現(xiàn)今已成為全球研究的熱點問題。因此,研究移植手術(shù)后CsA致肝損傷的相關(guān)危險因素,對臨床用藥具有重大意義。結(jié)合本課題組的前期研究基礎(chǔ),探討PXR-MRP2通路在環(huán)孢素所致藥物性肝損傷中的作用機(jī)制。本課題利用RNA干擾（RNA interference,RNAi）技術(shù),構(gòu)建MRP2基因沉默的細(xì)胞株;利用課題組前期建立的CsA致HepG2細(xì)胞肝損傷模型,結(jié)合構(gòu)建成功的沉默細(xì)胞株,給與不同濃度CsA,考察CsA對HepG2正常細(xì)胞、MRP2沉默細(xì)胞、PXR沉默細(xì)胞三組細(xì)胞的相關(guān)生化指標(biāo)及MRP2、PXR蛋白表達(dá)和mRNA的影響,在細(xì)胞水平探究CsA是否通過PXR信號通路調(diào)控MRP2的表達(dá)及初步闡明MRP2在CsA致肝損傷中的作用,為臨床用藥提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。方法:1.以帶Puro抗性基因的pHBLV質(zhì)粒為載體,人工合成MRP2-shRNA序列,pHBLV質(zhì)粒進(jìn)行酶... 

【文章來源】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pHBLV-MRP2-shRNA質(zhì)粒測序結(jié)果

PXR-MRP2通路在環(huán)孢素所致藥物性肝損傷中的作用研究33圖2-1BSA濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線2.4.3Western-blotting檢測PXR、MRP2蛋白表達(dá)MRP2沉默細(xì)胞株的WB結(jié)果顯示(圖2-2):對比MRP2沉默組、Control-MRP2組及HepG2組,MRP2沉默組MRP2基因的蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.05）具有統(tǒng)計學(xué)意義，說明RNAi介導(dǎo)的MRP2shRNA序列導(dǎo)入了HepG2細(xì)胞株中，成功構(gòu)建了MRP2沉默細(xì)胞株，且MRP2基因的沉默效率約為50%。對比Control-MRP2組和HepG2組，兩者的MRP2基因的蛋白表達(dá)沒有差異，證實導(dǎo)入其他基因序列不會影響目的基因蛋白的表達(dá)。PXR沉默細(xì)胞株的WB結(jié)果顯示(圖2-2):對比PXR沉默組、Contro-PXR組及HepG2組,PXR沉默組PXR基因的蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.05）具有統(tǒng)計學(xué)意義，驗證了PXR沉默細(xì)胞株仍然有效，且PXR沉默效率約為55%。

湖北中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文34圖2-2Westernblot檢測PXR,MRP2蛋白表達(dá)（sx，n=3）與HepG2組比較，aP<0.05,aaP<0.012.5小結(jié)與討論MRP2，也稱為小管多特異性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（cMOAT），由ABCC2基因編碼，由兩個ATP結(jié)合結(jié)構(gòu)域和三個跨膜結(jié)構(gòu)域組成。MRP2主要分布于肝細(xì)胞毛細(xì)膽管膜，在肝臟中表達(dá)最高,依靠水解ATP產(chǎn)生的能量,主動向細(xì)胞外轉(zhuǎn)運底物[44]，是多種有機(jī)陰離子如結(jié)合型膽紅素、膽汁酸、谷胱甘肽等排泄的主要載體蛋白[45-46]，在肝臟中它有助于消除帶正電荷的藥物，膽紅素，葡糖醛酸苷和結(jié)合物進(jìn)入膽汁，從而降低其底物的生物活性[47]。ABC轉(zhuǎn)運蛋白MRP2可能會影響許多藥物和內(nèi)源性底物的藥代動力學(xué)特性，導(dǎo)致耐藥性的發(fā)展，并且可能是藥物相互作用的關(guān)鍵部位。PXR在被利福平等PXR配體激活后，通過與基因中的響應(yīng)元件結(jié)合而誘導(dǎo)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]154例腎病綜合征患者環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測及其對療效、安全性的影響分析[J]. 李瑞蓮,陳文倩,張丹,王曉雪,覃旺軍,崔剛.  中國藥房. 2018(20)
[2]代謝組學(xué)在藥物性肝損傷研究中的應(yīng)用[J]. 徐榛,鄧中平,孫嘉彬.  中成藥. 2019(02)
[3]敘事護(hù)理對醫(yī)院獲得性急性腎損傷患者負(fù)性情緒和生活質(zhì)量的影響[J]. 蔣喜平.  中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新. 2018(23)
[4]基因沉默策略及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 周曉楠,宋雪蘭,楊媛,馬琛婧,何芳雁.  昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2018(01)
[5]毒理學(xué)研究的高內(nèi)涵篩選及其在藥物肝毒性研究中的應(yīng)用[J]. 葛帥,湯納平,付立杰,馬璟.  中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志. 2017(06)
[6]HPLC/MS測定環(huán)孢素A單用及聯(lián)用氟康唑的血藥濃度[J]. 易林高,吳明釵,黃鵬,陳曉孩,陸日鳴.  中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測. 2016(04)
[7]ABCC2基因單核苷酸多態(tài)性對藥物臨床應(yīng)用的影響[J]. 魏丹蕓,張洪,彭銳,張英.  中國藥師. 2015(12)
[8]慢病毒載體的改進(jìn)為基因治療帶來了新的希望[J]. 方芳,朱平.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2013(05)
[9]ABCC2基因多態(tài)性與腎移植受者環(huán)孢素所致肝功能異常的相關(guān)性研究[J]. 辛華雯,劉慧明,李元啟,黃暉,趙麗,余愛榮,李罄,吳笑春,李維亮,熊磊.  中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2013(07)
[10]伏立康唑?qū)彝皿w內(nèi)環(huán)孢素A的藥動學(xué)影響[J]. 鄧江紅,趙延斌.  中國藥師. 2012(12)

碩士論文
[1]黃連素通過PXR信號通路調(diào)控CYP3A和P-gp的機(jī)制研究[D]. 常偉宇.南方醫(yī)科大學(xué) 2016



本文編號：3369537