雙氫睪酮對大鼠原代卵泡顆粒細胞抗苗勒管激素表達的影響
發(fā)布時間：2021-08-24 20:05
目的探討雙氫睪酮（DHT）對大鼠原代卵泡顆粒細胞抗苗勒管激素（AMH）表達的影響。方法從95只21 d SD雌性大鼠中提取顆粒細胞原代培養(yǎng)48 h后,先用HE染色檢測細胞形態(tài),卵泡刺激素受體（FSHR）細胞免疫熒光檢測細胞純度;然后根據(jù)干預(yù)方法和實驗的不同,隨機將細胞分為對照組（無藥物干預(yù)）、10-8mol/L DHT組、10-5mol/L DHT組,2×10-5mol/L蛋白激酶B（Akt）抑制劑（MK-2206 2Hcl）組和10-8mol/L DHT+2×10-5mol/L MK-2206 2Hcl組,分別使用相應(yīng)濃度的試劑干預(yù)細胞3 h。干預(yù)完成后,細胞免疫熒光染色觀察AMH表達的部位和變化; Western blotting測定不同組的AMH、Akt、p-Akt蛋白表達量。結(jié)果大鼠原代卵泡顆粒細胞的純度為93. 33%±3. 09%,AMH表達在大鼠原代卵泡顆粒細胞膜和細胞質(zhì)中;與對照組相比,10-8mol/L DHT和10-5mol/L DHT...
【文章來源】：解剖學(xué)報. 2020,51(03)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
DHT體外干預(yù)大鼠原代卵泡顆粒細胞后對AMH蛋白表達的影響
圖5 DHT體外干預(yù)大鼠原代卵泡顆粒細胞后對AMH蛋白表達的影響本研究發(fā)現(xiàn)，DHT處理細胞后，p-Akt升高，這與Narkwichean等[4]指出雄激素可以使p-Akt升高研究結(jié)果一致。又有研究指出，p-Akt升高后AMH表達升高[6]，結(jié)合本實驗結(jié)果，更進一步證明了DHT上調(diào)AMH表達的作用。不僅如此，DHT處理細胞后使得p-Akt升高，推測DHT可能可以激活大鼠原代卵泡顆粒細胞內(nèi)的Akt信號通路。Akt是雄激素調(diào)控卵巢卵泡生長發(fā)育的重要信號通路，有研究指出，雄激素不僅可以通過非基因轉(zhuǎn)錄途徑促進Akt的磷酸化，還可以通過由雄激素受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄途徑激活A(yù)kt信號通路，從而調(diào)控卵泡細胞和顆粒細胞的生長發(fā)育[9,15]。有研究指出，Akt信號通路的激活不僅會推動顆粒細胞的增殖與分化，還會導(dǎo)致大量原始卵泡啟動發(fā)育[16～18]。結(jié)合本研究得到的結(jié)果DHT可能可以激活A(yù)kt信號通路，推測DHT可能通過激活A(yù)kt信號通路從而調(diào)控原始卵泡的生長發(fā)育。但是本實驗只能初步得出DHT可能是Akt信號通路的激活因子，DHT具體如何影響Akt信號通路，還需要更多的實驗加以驗證。
本研究發(fā)現(xiàn)，體外培養(yǎng)的大鼠顆粒細胞可以達到較高的純度并能良好地生長。使用DHT干預(yù)體外培養(yǎng)的大鼠顆粒細胞，能明顯增加AMH的表達。在卵巢中，原始卵泡啟動發(fā)育為初級卵泡后，AMH開始在顆粒細胞上表達，并隨著卵泡的生長發(fā)育其表達逐漸增加，在竇前卵泡和小的竇狀卵泡上表達最多，其后表達降低[4,12]。AMH作用是抑制原始卵泡的啟動生長、降低卵泡對FSH的反應(yīng)性，是卵巢儲備能力的1個指標(biāo)[14]。DHT可以增加顆粒細胞AMH的表達，推測雄激素能通過增加卵巢內(nèi)AMH的水平，減少每個周期所募集啟動的原始卵泡，有利于維持原始卵泡的數(shù)量。Laird等[9]指出，雄激素可以促進初級卵泡的生長發(fā)育，此外，Yang等[14]研究發(fā)現(xiàn)，體外培養(yǎng)添加AMH可以抑制原始卵泡的啟動激活，結(jié)合本研究結(jié)果，我們推測，雄激素在促進生長卵泡發(fā)育的同時，也作用于生長卵泡中的顆粒細胞，使其合成AMH。當(dāng)AMH達到一定水平時，會抑制原始卵泡啟動激活，從而減少原始卵泡消耗。Zhang等[8]研究表明，雄激素能夠通過上調(diào)AMH，血管內(nèi)皮生長因子(vescular endotherial growth factor,VEGF)和低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α)的表達水平來調(diào)節(jié)顆粒細胞的功能，這與本研究得到的結(jié)果一致。因此，雄激素增加顆粒細胞AMH的表達，可能對于維持女性生育力的儲備具有積極作用。圖2 HE染色觀察大鼠原代卵泡顆粒細胞形態(tài)，白色箭頭示細胞核
【參考文獻】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)化生長因子-β和Smad4在絕經(jīng)過渡期大鼠卵巢顆粒細胞中的表達[J]. 袁麗娟,任君旭,姬宏宇,張靜,張娟,丁艷. 解剖學(xué)報. 2018(01)
本文編號：3360637
【文章來源】：解剖學(xué)報. 2020,51(03)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
DHT體外干預(yù)大鼠原代卵泡顆粒細胞后對AMH蛋白表達的影響
圖5 DHT體外干預(yù)大鼠原代卵泡顆粒細胞后對AMH蛋白表達的影響本研究發(fā)現(xiàn)，DHT處理細胞后，p-Akt升高，這與Narkwichean等[4]指出雄激素可以使p-Akt升高研究結(jié)果一致。又有研究指出，p-Akt升高后AMH表達升高[6]，結(jié)合本實驗結(jié)果，更進一步證明了DHT上調(diào)AMH表達的作用。不僅如此，DHT處理細胞后使得p-Akt升高，推測DHT可能可以激活大鼠原代卵泡顆粒細胞內(nèi)的Akt信號通路。Akt是雄激素調(diào)控卵巢卵泡生長發(fā)育的重要信號通路，有研究指出，雄激素不僅可以通過非基因轉(zhuǎn)錄途徑促進Akt的磷酸化，還可以通過由雄激素受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄途徑激活A(yù)kt信號通路，從而調(diào)控卵泡細胞和顆粒細胞的生長發(fā)育[9,15]。有研究指出，Akt信號通路的激活不僅會推動顆粒細胞的增殖與分化，還會導(dǎo)致大量原始卵泡啟動發(fā)育[16～18]。結(jié)合本研究得到的結(jié)果DHT可能可以激活A(yù)kt信號通路，推測DHT可能通過激活A(yù)kt信號通路從而調(diào)控原始卵泡的生長發(fā)育。但是本實驗只能初步得出DHT可能是Akt信號通路的激活因子，DHT具體如何影響Akt信號通路，還需要更多的實驗加以驗證。
本研究發(fā)現(xiàn)，體外培養(yǎng)的大鼠顆粒細胞可以達到較高的純度并能良好地生長。使用DHT干預(yù)體外培養(yǎng)的大鼠顆粒細胞，能明顯增加AMH的表達。在卵巢中，原始卵泡啟動發(fā)育為初級卵泡后，AMH開始在顆粒細胞上表達，并隨著卵泡的生長發(fā)育其表達逐漸增加，在竇前卵泡和小的竇狀卵泡上表達最多，其后表達降低[4,12]。AMH作用是抑制原始卵泡的啟動生長、降低卵泡對FSH的反應(yīng)性，是卵巢儲備能力的1個指標(biāo)[14]。DHT可以增加顆粒細胞AMH的表達，推測雄激素能通過增加卵巢內(nèi)AMH的水平，減少每個周期所募集啟動的原始卵泡，有利于維持原始卵泡的數(shù)量。Laird等[9]指出，雄激素可以促進初級卵泡的生長發(fā)育，此外，Yang等[14]研究發(fā)現(xiàn)，體外培養(yǎng)添加AMH可以抑制原始卵泡的啟動激活，結(jié)合本研究結(jié)果，我們推測，雄激素在促進生長卵泡發(fā)育的同時，也作用于生長卵泡中的顆粒細胞，使其合成AMH。當(dāng)AMH達到一定水平時，會抑制原始卵泡啟動激活，從而減少原始卵泡消耗。Zhang等[8]研究表明，雄激素能夠通過上調(diào)AMH，血管內(nèi)皮生長因子(vescular endotherial growth factor,VEGF)和低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α)的表達水平來調(diào)節(jié)顆粒細胞的功能，這與本研究得到的結(jié)果一致。因此，雄激素增加顆粒細胞AMH的表達，可能對于維持女性生育力的儲備具有積極作用。圖2 HE染色觀察大鼠原代卵泡顆粒細胞形態(tài)，白色箭頭示細胞核
【參考文獻】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)化生長因子-β和Smad4在絕經(jīng)過渡期大鼠卵巢顆粒細胞中的表達[J]. 袁麗娟,任君旭,姬宏宇,張靜,張娟,丁艷. 解剖學(xué)報. 2018(01)
本文編號：3360637
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