背景:生精障礙是男性不育的主要原因之一,而精原細胞增殖分化是精子發(fā)生的啟動環(huán)節(jié),其調(diào)控異�？梢詫�(dǎo)致生精障礙,引起男性不育。維甲酸（RA）是維生素A在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物,能維持男性生殖系統(tǒng)正常發(fā)育,是啟動精原細胞分化并進入減數(shù)分裂的關(guān)鍵因子,可促進精原細胞的增殖分化,其機制可能與精原細胞增殖分化相關(guān)蛋白CCND1有關(guān)。本研究采用環(huán)磷酰胺和己烯雌酚兩種復(fù)合藥物建立穩(wěn)定的生精障礙小鼠動物模型為研究對象,觀察RA對模型小鼠生精障礙及睪丸組織中CCND1表達的影響,初步探討RA改善生精障礙的分子機制,為臨床應(yīng)用RA改善生精障礙男性的生殖功能提供實驗依據(jù)。方法:雄性昆明小鼠136只,隨機分為正常對照組和模型組,模型組包括環(huán)磷酰胺（CP）組、己烯雌酚（DES）組以及CP+DES組,腹腔注射,共計給藥14天,采用精子計數(shù)、睪丸和附睪組織切片HE染色檢測生精障礙模型是否成功,并選出最適的造模藥物濃度和方法。RA溶于DMSO后用玉米油稀釋成目標濃度,模型小鼠皮下注射不同劑量的RA（0,2.5,5,10 mg/kg/d）,或用RA（5 mg/kg/d）和雷帕霉素（RAPA,2.5 mg/kg/d）共處理模型... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

用藥后第2周小鼠睪丸組織的改變（HE染色，10×40）

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文224.1.2CP和DES聯(lián)合模型組，穩(wěn)定生精障礙的時效性采用聯(lián)合藥物處理小鼠后，繼續(xù)觀察生精障礙模型的穩(wěn)定時長直至第9周。收集睪丸進行HE染色觀察，結(jié)果顯示在正常對照小鼠睪丸的生精小管中，未分化的精原細胞、分化的精原細胞、精子細胞和絮狀精子均勻、有規(guī)律的排列在管腔內(nèi)；而CP和DES聯(lián)合模型組小鼠生精上皮內(nèi)的生殖細胞排列紊亂，生精細胞大量丟失，僅剩下少量未分化的精原細胞和支持細胞，少見或未見精子細胞和絮狀精子；從用藥后的第1w起，生精上皮表現(xiàn)出不同程度的生精紊亂，直至第9w，生精紊亂現(xiàn)象未見明顯恢復(fù)（圖2），表明生精障礙造模成功并且穩(wěn)定期至少大于9w。圖2生精障礙小鼠睪丸組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化（HE染色，10×40）a.對照組b.模型組(1w)c.模型組(3w)d.模型組(5w)e.模型組(7w)f.模型組(9w)4.1.3生精障礙小鼠附睪管中少或無精子產(chǎn)生在正常對照組小鼠的附睪管中可見大量成熟的絮狀精子，而1w至9w的模型組小鼠的附睪中少見或未見成熟精子。結(jié)果如圖3所示，造模后第1w仍可見少量精子尚未被排空，隨著時間延長，模型組小鼠附睪管中的精子數(shù)量逐漸減少，第3w開始至第5w的附睪內(nèi)幾乎不見精子，隨后開始緩慢出現(xiàn)精子但數(shù)量依舊很少。

第4章實驗結(jié)果23圖3生精障礙小鼠模型附睪組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化（HE染色，10×40）a.對照組b.模型組(1w)c.模型組(3w)d.模型組(5w)e.模型組(7w)f.模型組(9w)4.1.4生精障礙小鼠的精子密度顯著下降與正常對照組的小鼠比較，生精障礙組的小鼠精子密度顯著下降，并且在9w內(nèi)未見明顯恢復(fù)。表1生精障礙小鼠模型精子密度檢測值（x±s，n=4）組別精子密度（×106/mL）對照組21.63±0.97模型組(1w)2.38±0.77*模型組(3w)0.88±0.24*模型組(5w)1.88±0.69*模型組(7w)3.13±0.47*模型組(9w)4.88±0.99*(注：*P<0.05vs對照組)由此可見，聯(lián)合應(yīng)用環(huán)磷酰胺和己烯雌酚復(fù)制生精障礙小鼠動物模型穩(wěn)定性較好。由于生精障礙模型不能永久維持，因此在保護動物生命安全的前提下應(yīng)適當(dāng)延長模型生精功能紊亂的時間，有利于進行后續(xù)研究。


本文編號：3340614