目的:建立HPLC法同時測定復(fù)方氨基酸注射液中色氨酸、酪氨酸、乙酰酪氨酸的含量。方法:采用Waters Symmetry^?C18色譜柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流動相為8 mmol·L^-1磷酸二氫鉀溶液-甲醇（9∶1）,檢測波長280 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱溫35℃。結(jié)果:3個氨基酸可完全分離,色氨酸、酪氨酸、乙酰酪氨酸的線性范圍分別為12.15～242.96、4.06～81.13、12.36～247.20μg·mL^-1（r均為0.999 9）,回收率分別為98.0%、99.4%、102.0%（n=9）。7家企業(yè)生產(chǎn)的復(fù)方氨基酸注射液中色氨酸、酪氨酸、乙酰酪氨酸的含量分別為88.7%～113.8%、89.4%～103.1%、89.9%～101.3%,結(jié)果均合格。結(jié)論:所用方法可同時測定復(fù)方氨基酸注射液中3個氨基酸含量,并為現(xiàn)行標準的提高提供可靠依據(jù)。 

【文章來源】：藥物分析雜志. 2020,40(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

空白溶液（a）、混合對照品溶液A(b）、混合對照品溶液B(c）、小兒19AA-Ⅰ樣品溶液（d）、小兒18AA-Ⅱ樣品溶液（e）和小兒18AA-Ⅰ樣品溶液（f）的色譜圖

曾考察不同色譜柱和流動相系統(tǒng)下3個氨基酸的的分離度，采用20 mmol·L-1磷酸二氫鈉溶液（磷酸調(diào)pH 2.5）-乙腈（9∶1）為流動相[18]及色譜柱為Thermo C18時，乙酰酪氨酸和色氨酸不能分離；參照《中華人民共和國藥典》復(fù)方氨基酸注射液（18AA-Ⅵ）下酪氨酸與N-乙酰-L-色氨酸的含量測定方法，采用8 mmol·L-1磷酸二氫鉀溶液-甲醇（9∶1）為流動相[19]及Thermo C18色譜柱，乙酰酪氨酸和色氨酸分離度R為1.57；而采用8 mmol·L-1磷酸二氫鉀溶液-甲醇（9∶1）為流動相及Waters Symmetry?C18柱時，乙酰酪氨酸和色氨酸分離度大大改善（圖1）。因此，選擇了本文的色譜條件。3.2 樣品測定

本文方法測定結(jié)果與法定標準測定結(jié)果的比較（圖3）表明：色氨酸結(jié)果基本一致；乙酰酪氨酸B公司和C公司的法定標準檢測結(jié)果偏低，分析原因應(yīng)是B、C公司參考的同一法定標準[2]，乙酰酪氨酸含量采用水解后用氨基酸分析儀測定，而其他公司則用HPLC法[3]，水解后氨基酸分析儀測定濃度低于HPLC法，可能是水解過程中乙酰酪氨酸有部分損失；酪氨酸的法定標準檢測結(jié)果偏高，分析原因應(yīng)是現(xiàn)行標準中酪氨酸的檢測方法為UV雙波長法，其處方組成酪氨酸1.4 g·L-1是以酪氨酸0.4 g·L-1和乙酰酪氨酸1.2 g·L-1的方式投料，而檢測時對照品用的是酪氨酸，相當于把乙酰酪氨酸的校正因子當作1計算總酪氨酸的量，但實際測定乙酰酪氨酸的校正因子為1.16，該方法沒有考慮酪氨酸和乙酰酪氨酸響應(yīng)差異，導致檢測結(jié)果偏高。以上也說明了法定標準中存在問題的方法應(yīng)及時修訂。本文擬定方法專屬性強、結(jié)果準確、操作簡便，可為小兒復(fù)方氨基酸注射液含量測定的標準提高提供依據(jù)。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3340056