目的:制備酪氨酸激酶樣孤兒受體1（tyrosine-kinase-like orphan receptor1,ROR1）的全分子抗體（ROR1-IgG1）及其與東亞鉗蝎鎮(zhèn)痛抗腫瘤多肽的融合蛋白的全分子抗體（fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti-tumor polypeptide IgG1,IgG1-AGAP）,檢測(cè)ROR1-IgG1和IgG1-AGAP對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,探討ROR1在卵巢癌中的作用機(jī)制。方法:以本實(shí)驗(yàn)室篩選并保存的ROR1Fab載體為模板,構(gòu)建ROR1-IgG1和IgG1-AGAP真核表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO-S）,收集上清并純化。利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、Biacore X100、免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)（fluorescence-activated cell sorting,FACS）等評(píng)估IgG1-AGAP和ROR1-IgG1的免疫學(xué)活性。通過(guò)CCK-8法、劃痕實(shí)驗(yàn)、Tr... 

【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,40(03)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

ELISA檢測(cè)IgG1-AGAP和ROR1-IgG1與抗原的結(jié)合活性

采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)IgG1-AGAP和ROR1-IgG1對(duì)細(xì)胞選擇性結(jié)合的活性。結(jié)果顯示：分別用IgG1-AGAP或ROR1-IgG1處理HO8910和IOSE386細(xì)胞，在HO8910中檢測(cè)到的平均熒光強(qiáng)度（mean fluorescence intensity,MFI）值遠(yuǎn)高于IOSE386細(xì)胞（IgG1-AGAP組：58.00%vs.0.63%;ROR1-IgG1組：61.00%vs.0.91%,P<0.05），顯示IgG1-AGAP或ROR1-IgG1可特異性結(jié)合到高表達(dá)ROR1蛋白的HO8910細(xì)胞，而不與幾乎不表達(dá)ROR1蛋白的IOSE386細(xì)胞結(jié)合（圖6）。2.4 體外評(píng)估IgG1-AGAP和ROR1-IgG1對(duì)卵巢癌細(xì)胞惡性行為的抑制作用

通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)IgG1-AGAP和ROR1-IgG1對(duì)HO8910細(xì)胞和IOSE386細(xì)胞遷移的影響。如圖8所示：HO8910細(xì)胞中，IgG1-AGAP組24 h、48 h的遷移率分別為24.0%和31.7%;ROR1-IgG1組24 h、48 h的遷移率分別為32.3%和50.2%;PBS組24 h、48 h的遷移率分別為38.4%和75.2%。與PBS組相比，暴露于32μg/mL ROR1-IgG1或IgG1-AGAP中48 h，顯著抑制了HO8910細(xì)胞劃痕區(qū)域的閉合，其中IgG1-AGAP處理組24、48 h的愈合率均低于ROR1-IgG1處理組，且兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而在IOSE386細(xì)胞，不同時(shí)間段細(xì)胞的遷移率差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。2.4.3 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]全人源抗Trop-2 IgG的制備及對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物特性的影響[J]. 劉金榮,白璐月,唐奇,王一荃,葉春萍,殷鄭娜,朱進(jìn),馮振卿,童華,張慧林.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(03)



本文編號(hào)：3338015