目的:制備酪氨酸激酶樣孤兒受體1（tyrosine-kinase-like orphan receptor1,ROR1）的全分子抗體（ROR1-IgG1）及其與東亞鉗蝎鎮(zhèn)痛抗腫瘤多肽的融合蛋白的全分子抗體（fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti-tumor polypeptide IgG1,IgG1-AGAP）,檢測ROR1-IgG1和IgG1-AGAP對卵巢癌細胞生物學特性的影響,探討ROR1在卵巢癌中的作用機制。方法:以本實驗室篩選并保存的ROR1Fab載體為模板,構(gòu)建ROR1-IgG1和IgG1-AGAP真核表達載體,并轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細胞（CHO-S）,收集上清并純化。利用酶聯(lián)免疫吸附實驗（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、Biacore X100、免疫熒光、流式細胞術(shù)（fluorescence-activated cell sorting,FACS）等評估IgG1-AGAP和ROR1-IgG1的免疫學活性。通過CCK-8法、劃痕實驗、Tr... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學學報(自然科學版). 2020,40(03)北大核心CSCD

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ELISA檢測IgG1-AGAP和ROR1-IgG1與抗原的結(jié)合活性

采用流式細胞術(shù)檢測IgG1-AGAP和ROR1-IgG1對細胞選擇性結(jié)合的活性。結(jié)果顯示：分別用IgG1-AGAP或ROR1-IgG1處理HO8910和IOSE386細胞，在HO8910中檢測到的平均熒光強度（mean fluorescence intensity,MFI）值遠高于IOSE386細胞（IgG1-AGAP組：58.00%vs.0.63%;ROR1-IgG1組：61.00%vs.0.91%,P<0.05），顯示IgG1-AGAP或ROR1-IgG1可特異性結(jié)合到高表達ROR1蛋白的HO8910細胞，而不與幾乎不表達ROR1蛋白的IOSE386細胞結(jié)合（圖6）。2.4 體外評估IgG1-AGAP和ROR1-IgG1對卵巢癌細胞惡性行為的抑制作用

通過劃痕實驗來檢測IgG1-AGAP和ROR1-IgG1對HO8910細胞和IOSE386細胞遷移的影響。如圖8所示：HO8910細胞中，IgG1-AGAP組24 h、48 h的遷移率分別為24.0%和31.7%;ROR1-IgG1組24 h、48 h的遷移率分別為32.3%和50.2%;PBS組24 h、48 h的遷移率分別為38.4%和75.2%。與PBS組相比，暴露于32μg/mL ROR1-IgG1或IgG1-AGAP中48 h，顯著抑制了HO8910細胞劃痕區(qū)域的閉合，其中IgG1-AGAP處理組24、48 h的愈合率均低于ROR1-IgG1處理組，且兩組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而在IOSE386細胞，不同時間段細胞的遷移率差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。2.4.3 Transwell侵襲實驗

【參考文獻】：
期刊論文
[1]全人源抗Trop-2 IgG的制備及對卵巢癌細胞生物特性的影響[J]. 劉金榮,白璐月,唐奇,王一荃,葉春萍,殷鄭娜,朱進,馮振卿,童華,張慧林.  南京醫(yī)科大學學報(自然科學版). 2016(03)



本文編號：3338015