目的:應(yīng)用細(xì)胞學(xué)、藥理學(xué)、分子生物學(xué)等體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究光熱治療、PD-1抗體藥物治療以及光熱治療協(xié)同PD-1抗體治療小鼠肝癌的治療效果;構(gòu)建級聯(lián)雙重靶向脂質(zhì)體,研究光熱治療對PD-1結(jié)合位點(diǎn)PD-L1表達(dá)的影響,探究光熱治療協(xié)同PD-1抗體治療的及機(jī)制。方法:1.構(gòu)建H22肝癌balb/c荷瘤鼠模型,平行分組,設(shè)置空白組、光熱治療組、手術(shù)組對小鼠腫瘤進(jìn)行治療。利用流式細(xì)胞分析術(shù)、免疫熒光分析小鼠腫瘤組織內(nèi)CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞浸潤情況。2.利用免疫印記分析、Q-PCR、免疫組化分析在不同治療后,體外腫瘤細(xì)胞以及小鼠腫瘤組織內(nèi)PD-L1表達(dá)情況,以及IFN-γ表達(dá)情況。3.利用流式分析術(shù),分析小鼠腫瘤微環(huán)境內(nèi)CD38表達(dá)對T細(xì)胞殺傷毒性的評價(jià)。4.構(gòu)建級聯(lián)雙重靶向腫瘤微環(huán)境響應(yīng)熱敏脂質(zhì)體載藥系統(tǒng),對級聯(lián)雙重靶向腫瘤微環(huán)境響應(yīng)熱敏脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)進(jìn)行表征。5.對H22荷瘤鼠進(jìn)行分組治療,記錄分析小鼠腫瘤體積變化、小鼠存活率、臟器毒性情況。6.對4T1荷瘤鼠進(jìn)行分組治療,記錄分析小鼠腫瘤體積變化、小鼠存活率、肺轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果:1.通過流式細(xì)胞分析術(shù)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與空白對照組、手... 

【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－４不同細(xì)胞系ＰＤ－Ｌ１的ｍＲＮＡ轉(zhuǎn)錄水平??（利用Ｔ檢驗(yàn)檢測，與對照組比較，＊ｐ＜０．０５）??

０．２．０－?；?＊?１?＊?Ｉ??ｉｌｌｉｌｌＭ??圖１－４不同細(xì)胞系ＰＤ－Ｌ１的ｍＲＮＡ轉(zhuǎn)錄水平??（利用Ｔ檢驗(yàn)檢測，與對照組比較，＊ｐ＜０．０５）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４?Ｔｈｅ?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?Ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＰＤ－Ｌ１?ｉｎ?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?Ｃｅｌｌ?Ｌｉｎｅｓ??（Ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｇｒｏｕｐ，＊?Ｐ?＜?０．０５?ｂｙ?Ｔ?ｔｅｓｔ）??此外，利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ對不同細(xì)胞系的兩個實(shí)驗(yàn)組考察了?ＰＤ－Ｌｌ蛋白的表達(dá)水平，??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)與Ｑ－ＰＣＲ結(jié)果一致，如圖１－５所示。結(jié)果證明，溫度升高確實(shí)能增加腫??瘤細(xì)胞中ＰＤ－Ｌ１的表達(dá)。可提高免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療的療效。??４Ｔ１?ＨｅｐＧ２?ＭＣＦ７?Ｕ８７?Ａ５４９??ＰＤ－Ｌｌ?—??＿＿＿＿＿＿?ｍ??ＧＡＤＰＨ?卜一擊？??Ｗａｔｅｒ－Ｂａｔｈ?－?＋?－?＋?－?＋?－?＋?－?＋??圖１－５不同細(xì)胞系ＰＤ－Ｌｌ的蛋白表達(dá)水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＰＤ－Ｌｌ?ｉｎ?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?Ｃｅｌｌ?Ｌｉｎｅｓ??接下來，研究了不同時間對ＰＴＴ后腫瘤組織中ＰＤ－Ｌｌ表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，??ＰＴＴ可以提高腫瘤組織中ＰＤ－Ｌ１的表達(dá)水平。對注射有雙側(cè)Ｈ２２腫瘤細(xì)胞的小鼠進(jìn)行分??組治療。治療一層，考察另一側(cè)。根據(jù)Ｑ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)結(jié)果，接種后第１０天ＴＯ－Ｌ１的ｍＲＮＡ??轉(zhuǎn)錄水平較其他組下降２＿６倍。并且，ＰＤ－Ｌｌ在第５天的轉(zhuǎn)錄水平高于第１０天，手術(shù)治療??的兩組中也有同樣的現(xiàn)象

利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)和免疫組化實(shí)驗(yàn)考察不同治療組ＰＤ－Ｌｌ在腫瘤組織的??表達(dá)。結(jié)果表明，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)和免疫組化實(shí)驗(yàn)均與Ｑ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。這些結(jié)??果證實(shí)ＰＤ－Ｌ１的表達(dá)與治療后的時間相關(guān)。如圖１－７及圖１－８所示。??ＰＤ－Ｌｌ??ＧＡＤＰＨ??５－Ｃ?５－Ｐ?５－Ｓ?１０－Ｃ?１０－Ｐ１０－Ｃ??圖１－７不同治療組腫瘤組織ＰＤ－Ｌｌ的蛋白表達(dá)水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１－７?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＰＤ－Ｌｌ?ｉｎ?Ｔｕｍｏｒ?Ｔｉｓｓｕｅｓ?ｏｆ?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?Ｇｒｏｕｐｓ??２０??


本文編號：3321364