目的:通過(guò)觀(guān)察艾司洛爾對(duì)膿毒癥大鼠的生存情況、心肌病理、心肌酶學(xué)及炎癥介質(zhì)的影響,檢測(cè)TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路的活化情況,進(jìn)而探討艾司洛爾在膿毒癥大鼠中的心肌保護(hù)作用及其可能機(jī)制,為艾司洛爾治療膿毒癥心肌病提供理論依據(jù)。方法:選取60只雄性清潔級(jí)SD大鼠作為研究對(duì)象,采用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組（Sham group,Sham組）、膿毒癥組（Model group,Model組）、艾司洛爾組（Esmolol group,ES組）,每組20只。Sham組行盲腸探查術(shù),Model組、ES組采用盲腸結(jié)扎穿孔法（CLP法）建立膿毒癥大鼠模型。術(shù)后,ES組持續(xù)微量泵泵入艾司洛爾稀釋液1ml/h[15mg·kg-1·h-1],共計(jì)6h。Sham組、Model組泵入生理鹽水1ml/h,共計(jì)6h。術(shù)后24小時(shí)觀(guān)察各組大鼠生存情況,取腹主動(dòng)脈血,檢測(cè)肌鈣蛋白I（TnI）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）表達(dá)量,取左心室游離壁行HE染色觀(guān)察心肌病理學(xué)變化,Western blot法檢測(cè)Toll樣受體-4（Toll-like receptor 4,TLR4... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TLR4/MyD88/NF-κB蛋白信號(hào)通路結(jié)構(gòu)示意圖

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文8（3）檢測(cè)步驟：如圖2所示。圖2酶聯(lián)免疫吸附法步驟（4）結(jié)果判讀：用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均OD值，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo)，用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，樣品中TNF-α含量可通過(guò)對(duì)應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)換算出相應(yīng)的濃度。（5）同樣方法步驟測(cè)血清中IL-1β的濃度。2.6WesternBlot測(cè)心肌組織TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表達(dá)量（1）總蛋白的提取：電子天平稱(chēng)取100mg心肌組織，組織剪剪碎心肌組織，按每20mg組織加入200mg組織細(xì)胞裂解液，用玻璃勻漿器勻漿，裂解后的樣品12000r/min離心10min，取上清液即總蛋白溶液。（2）BCA法蛋白濃度測(cè)定①蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的制備：取0.8ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配置液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)（BSA）中，充分溶解后配置成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。取20ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液加入980mlPBS中稀釋?zhuān)磁涞?.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。②BCA工作液的配置：將試劑A：試劑B按50：1配置成BCA工作液，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。③蛋白濃度檢測(cè)：將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20ml加入到96

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文12結(jié)果1艾司洛爾對(duì)大鼠生存情況的影響1.1艾司洛爾對(duì)大鼠存活率的影響本實(shí)驗(yàn)共觀(guān)察24小時(shí)，其中假手術(shù)組死亡2只，存活率為90.0%；膿毒癥組死亡9只，存活率為55.0%；艾司洛爾組死亡7只，存活率為65.0%。膿毒癥組存活率較假手術(shù)組顯著降低（x2=6.14，P＜0.05），艾司洛爾組與膿毒癥組之間大鼠存活率無(wú)顯著性差異（x2=0.42，P＞0.05）。（圖3）1.2艾司洛爾對(duì)大鼠行為學(xué)的影響CLP術(shù)后6h，膿毒癥組大鼠均出現(xiàn)活動(dòng)減少、精神萎靡、毛發(fā)豎立、寒戰(zhàn)，術(shù)后12h大鼠出現(xiàn)嗜睡、毛色枯萎、蜷縮于鼠籠角落、眼鼻出血、腹瀉等膿毒癥癥狀。假手術(shù)組大鼠傷口愈合良好，毛色潔白有光澤，活動(dòng)度好，正常進(jìn)食。艾司洛爾組大鼠狀態(tài)與膿毒癥組相比，其感染中毒癥狀較輕，但相對(duì)于假手術(shù)組狀態(tài)較差。圖3各組大鼠24小時(shí)生存率注：Model組與Sham組比較，存活率降低，#P＜0.05；ES組與Model組比較，存活率升高，※P＞0.052艾司洛爾對(duì)大鼠心肌病理學(xué)的影響光鏡下假手術(shù)組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，纖維肌絲束排列緊密，未見(jiàn)明顯水腫、充血、變性及壞死；膿毒癥組可見(jiàn)心肌細(xì)胞大量壞死，呈空泡樣變性，心肌纖維明顯水腫，排列疏松，部分心肌纖維斷裂，細(xì)胞核腫脹，間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；艾司洛爾組與膿毒癥組相比仍有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，但心肌細(xì)胞壞死減少，心肌纖維排列欠規(guī)整，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]艾司洛爾對(duì)膿毒癥大鼠腦保護(hù)作用的研究[D]. 李言鵬.蘭州大學(xué) 2019
[2]艾司洛爾對(duì)膿毒癥大鼠肺臟和腸道保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 李杜鵬.蘭州大學(xué) 2017
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本文編號(hào)：3278047