目的探討萘醌老化黑碳（1,4NQ-BC）對Treg細(xì)胞分化的影響及其機(jī)制方法從6～8周齡C57BL/6小鼠的淺表淋巴結(jié)中用磁珠分選法提取幼稚CD4⁺T細(xì)胞,分為對照組（Th0）、TGF-β誘導(dǎo)組（TGF-β）和在TGF-β基礎(chǔ)上加入1,4NQ-BC的處理組（5 ng/ml的TGF-β+50μg/ml的1,4NQ-BC）,于體外誘導(dǎo)分化,3 d后收集細(xì)胞,用Foxp3-PE染色后進(jìn)行流式檢測;取適量各組細(xì)胞提取蛋白,進(jìn)行Western blot實驗,檢測Smad2蛋白量結(jié)果 TGF-β誘導(dǎo)組相對于對照組Treg細(xì)胞比例從0.75%增加到43.4%（P<0.05）,加入1,4NQ-BC的處理組相較于TGF-β誘導(dǎo)組,Treg細(xì)胞比例從43.4%下降至10.33%（P<0.05）;Western blot實驗顯示相對于TGF-β誘導(dǎo)組, 1,4NQ-BC處理組TGF-β通路上的Smad2蛋白量明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 1,4NQ-BC在體外抑制幼稚CD4+T細(xì)胞向Treg分化,其作用機(jī)制可能是通過抑制TGF-β通路上的Smad2... 

【文章來源】：毒理學(xué)雜志. 2020,34(02)CSCD

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【部分圖文】：

1,4NQ-BC對Smad2蛋白的影響

采用MTT染色法,檢測了1,4NQ-BC染毒后T細(xì)胞的存活率,參考本實驗室之前的研究結(jié)果,設(shè)立了5組染毒濃度。實驗結(jié)果表明(圖1),25、50、75和100 μg/ml組細(xì)胞存活率分別為96.6%、93%、86%和62%。其中75與100 μg/ml組細(xì)胞存活率相比于對照組降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),所以選擇較為合適的50 μg/ml作為后續(xù)實驗的染毒濃度。2.1.3 1,4NQ-BC對流式檢測結(jié)果影響的排除:

對3組細(xì)胞提取的蛋白進(jìn)行Western blot,得到的結(jié)果如圖3所示,相對于Th0組,TGF-β誘導(dǎo)組的Smad2含量稍有升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);給予1,4NQ-BC后,相對于TGF-β誘導(dǎo)組,Smad2蛋白含量明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。圖3 1,4NQ-BC對Smad2蛋白的影響

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3270807