細胞周期蛋白依賴性激酶1（Cyclin dependent kinase 1,CDK1）對細胞生存至關重要,在很多生物學過程中都發(fā)揮著必不可少的作用,包括細胞周期調控、DNA損傷修復、細胞周期檢查位點激活等。本課題研究發(fā)現(xiàn)CDK1在S期促進新生DNA鏈的合成,豐富了對CDK1功能的認識。我們發(fā)現(xiàn)利用小分子化合物在不引起細胞周期變化的情況下抑制CDK1,可以引起顯著的DNA損傷反應,包括γH2AX和RPA的磷酸化,且呈現(xiàn)濃度依賴性和時間依賴性。進一步研究發(fā)現(xiàn)抑制CDK1引起的DNA損傷與DNA復制相關,并最終導致基因組的不穩(wěn)定性。本研究還發(fā)現(xiàn)抑制CDK1的活性可以明顯增加腫瘤細胞對化療藥物的敏感性,包括PARP抑制劑Olaparib—一種新型的抗腫瘤特效藥。這些發(fā)現(xiàn)揭示了 CDK1的多功能性,對腫瘤化療中的聯(lián)合用藥可能具有一定的借鑒意義。 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．短時間抑制ＣＤＫｌ能以時間依賴和濃度依賴的方式導致ＤＮＡ損傷反應

ｆｏｃｉ在復制期細胞和非復制細胞中的分布。我們胸腺嘧啶類似物用ＥｄＵ染色來標??記ＤＮＡ復制，ＥｄＵ陽性則表明細胞發(fā)生ＤＮＡ復制。結果顯示短時間抑制ＣＤＫ１??主要在ＥｄＵ陽性細胞中導致了顯著的ＤＮＡ損傷反應（圖２Ａ－Ｂ）。進而通過對單??細胞進行分析，我們觀察到大部分的ｙＨ２ＡＸｆｏｃｉ點與ＤＮＡ復制位點共定位，說明??抑制ＣＤＫ１引起的ＤＮＡ損傷確實與復制相關。此外，我們應用了明確能引起ＤＮＡ??復制相關損傷的順鉑作為陽性對照，結果表明其引起的ＥｄＵ－ＹＨ２ＡＸ共定位比例與??抑制ＣＤＫ１接近（圖２Ｃ－Ｄ），而通過化學切割ＤＮＡ鏈造成復制無關的ＤＮＡ損傷??的博萊霉素并未引起與ＥｄＵ共定位的ｙＨ２ＡＸ?ｆｏｃｉ?（圖２Ｃ－Ｄ），這些結果證實了短??時間抑制ＣＤＫ１確實通過作用于ＤＮＡ復制從而引起損傷反應。當用一種ＤＮＡ聚??合酶抑制劑阿非迪霉素完全阻滯ＤＮＡ復制時，抑制ＣＤＫ１未能引起ＤＮＡ損傷反??應，再次佐證了?ＣＤＫ１防止ＤＮＡ復制相關損傷的作用（圖２Ｅ）。綜上所述，這些??結果表明ＣＤＫ１在防止復制相關的ＤＮＡ損傷中發(fā)揮重要作用

實驗結果??結果，我們運用胸腺嘧啶雙阻斷法將細胞同步在Ｇ１／Ｓ轉換點，再釋放細胞進入Ｓ??期，然后在不同的時間點用ＥｄＵ標記ＤＮＡ合成（圖３Ｄ），再利用流式細胞術分??析ＥｄＵ熒光強度，定量檢測抑制ＣＤＫ１對于ＤＮＡ新生鏈合成的影響。結果顯示??在Ｓ期不同階段抑制ＣＤＫ１都導致了?ＥｄＵ熒光強度顯著減少，特別是Ｓ期中期（圖??３Ｅ）。這些結果都說明了?ＣＤＫ１對于Ｓ期新生ＤＮＡ的有效合成是必需的。此前有??觀點認為：在有絲分裂之前


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