MAD2（有絲分裂阻滯缺陷2樣蛋白1,MAD2L1）是細(xì)胞有絲分裂過程中紡錘體組裝檢測(cè)點(diǎn)的重要功能蛋白,與染色體穩(wěn)定性密切相關(guān)。p31-comet是MAD2的結(jié)合蛋白,能夠抑制MAD2的功能,與有絲分裂檢測(cè)點(diǎn)沉默和有絲分裂退出有關(guān)。在細(xì)胞有絲分裂過程中,有絲分裂檢測(cè)點(diǎn)功能異常會(huì)造成染色體不穩(wěn)定性,最終可導(dǎo)致細(xì)胞癌變。在膠質(zhì)瘤組織中的,MAD2表達(dá)水平異常,顯著高于正常腦組織,然而其在膠質(zhì)瘤中的功能仍是未知。在本研究中,我們利用慢病毒介導(dǎo)敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet來研究內(nèi)源性MAD2和p31-comet在膠質(zhì)瘤中的功能,結(jié)果表明敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet能有效抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87和U251的增殖、存活以及遷移能力。進(jìn)一步的探究發(fā)現(xiàn)敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet能阻滯細(xì)胞周期、影響周期相關(guān)蛋白的表達(dá)以及促進(jìn)細(xì)胞衰老。此外,我們還研究了MAD2和p31-comet對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞耐藥性的影響。采用PTX和VBL兩種不同的微管抑制劑,我們發(fā)現(xiàn)敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet能顯著提高U87和U251細(xì)胞對(duì)PTX和VBL的耐受性。綜上所述,我們的研究證明了內(nèi)源性... 

【文章來源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要1
Abstract 1
摘要2
Abstract 2
縮略詞索引
第一部分 P31-comet/MAD2在膠質(zhì)瘤中的功能研究
    第1章 前言
        1.1 膠質(zhì)瘤研究背景
            1.1.1 惡性膠質(zhì)瘤發(fā)病過程
            1.1.2 膠質(zhì)瘤侵襲
            1.1.3 惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療現(xiàn)狀
        1.2 MAD2的研究背景
            1.2.1 MAD2蛋白結(jié)構(gòu)與功能
            1.2.2 MAD2與染色體不穩(wěn)定性
            1.2.3 MAD2與癌癥
        1.3 p31-comet的研究背景
            1.3.1 p31-comet的結(jié)構(gòu)與功能
            1.3.2 p31-comet與腫瘤
        1.4 微管與微管抑制劑
            1.4.1 微管的結(jié)構(gòu)與功能
            1.4.2 微管抑制劑的作用機(jī)制
            1.4.3 微管抑制劑耐藥機(jī)制
        1.5 SAC與微管抑制劑
    第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 質(zhì)粒構(gòu)建
            2.2.1 干擾質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.2.2 過表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3 篩選有效的干擾或過表達(dá)治療
        2.4 慢病毒的包裝
        2.5 慢病毒感染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        2.6 蛋白樣品制備
        2.7 蛋白免疫印跡分析(Western Blot)
            2.7.1 配制SDS-PAGE凝膠
            2.7.2 電泳
            2.7.3 轉(zhuǎn)膜
            2.7.4 封閉
            2.7.5 孵育一抗
            2.7.6 孵育二抗
            2.7.7 影
        2.8 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.9 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.10 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
        2.11 細(xì)胞衰老檢測(cè)
        2.12 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)
        2.13 藥敏實(shí)驗(yàn)
        2.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 慢病毒有效性驗(yàn)證
            3.1.1 Western blot驗(yàn)證干擾后MAD2的蛋白水平
            3.1.2 Western blot驗(yàn)證過表達(dá)p31-comet病毒的有效性
        3.2 敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和存活能力
            3.2.1 敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力
            3.2.2 敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的克隆形成
        3.3 敲減MAD2影響了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的周期分布
        3.4 敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet影響有絲分裂相關(guān)蛋白的表達(dá)
            3.4.1 敲減MAD2影響有絲分裂相關(guān)蛋白的表達(dá)
            3.4.2 過表達(dá)p31-comet影響有絲分裂相關(guān)蛋白的表達(dá)
        3.5 敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞衰老
            3.5.1 敲減MAD2促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞衰老
            3.5.2 過表達(dá)p31-comet促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞衰老
        3.6 敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移
            3.6.1 敲減MAD2抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移
            3.6.2 過表達(dá)p31-comet抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移
        3.7 敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)微管抑制劑的耐受性
            3.7.1 敲減MAD2促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)微管抑制劑的耐受性
            3.7.2 過表達(dá)p31-comet促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)微管抑制劑的耐受性
        3.8 敲減MAD2降低微管抑制劑對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期分布的影響
        3.9 敲減MAD2或過表達(dá)p31-comet降低微管抑制劑對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            3.9.1 敲減MAD2降低微管抑制劑對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            3.9.2 過表達(dá)p31-comet降低微管抑制劑對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
第二部分 MiR-146a在肝癌中的功能研究
    第1章 前言
        1.1 肝癌的簡介
            1.1.1 肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制
            1.1.2 肝癌的診斷和治療
            1.1.3 肝癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移
        1.2 MiR-146a的研究背景
            1.2.1 MiR-146家族概述
            1.2.2 MiR-146a的靶基因與功能
            1.2.3 MiR-146a與自身免疫疾病
            1.2.4 MiR-146a與癌癥
        1.3 TRAF6
    第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 臨床樣本的收集
        2.3 RNA提取
        2.4 定量PCR
        2.5 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 miR-146a在肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況
        3.2 TRAF6在在肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況
        3.3 miR-146a/TRAF6對(duì)肝癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)生長的影響
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄Ⅰ 在校期間發(fā)表的文章和專利


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Targeting Wnt/β-catenin pathway in hepatocellular carcinoma treatment[J]. Valery Vilchez,Lilia Turcios,Francesc Marti,Roberto Gedaly.  World Journal of Gastroenterology. 2016(02)
[2]Clusterin:Review of research progress and looking ahead to direction in hepatocellular carcinoma[J]. Peng Xiu,Xiao-Feng Dong,Xin-Ping Li,Jie Li.  World Journal of Gastroenterology. 2015(27)
[3]Radiation therapy has been shown to be adaptable for various stages of hepatocellular carcinoma[J]. Yasuteru Kondo,Osamu Kimura,Tooru Shimosegawa.  World Journal of Gastroenterology. 2015(01)



本文編號(hào)：3212524