發(fā)布時間：2021-06-02 20:32

　　目的:構(gòu)建基于報告基因靶向NF-κB信號通路的抑制劑高通量篩選模型,篩選得到基于NF-κB信號通路的抗腫瘤活性成分,進(jìn)而探討活性成分的抗腫瘤機制及聯(lián)合給藥情況。方法:1、將pNF-κB-luc報告基因質(zhì)粒、內(nèi)參海腎熒光素酶質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到Hek293細(xì)胞中,考察不同給藥劑量、給藥時間、轉(zhuǎn)染濃度等試驗參數(shù)對報告基因模型構(gòu)建的影響,構(gòu)建雙熒光素酶報告基因模型,以NF-κB的抑制劑PDTC為陽性藥,篩選基于LPS誘導(dǎo)激活的NF-κB通路抑制劑。2、篩選得到的活性成分,采用CCK-8法測定竹節(jié)香附素A（RDA）的細(xì)胞毒性,計算IC₅₀。免疫熒光法研究RDA對NF-κB p65及NF-κB p50的激活-核轉(zhuǎn)運情況,RT-PCR技術(shù)研究RDA對于NF-κB通路中mRNA轉(zhuǎn)錄的影響;Western Blot技術(shù)檢測RDA對NF-κB通路中活性蛋白NF-κBp65、IκBα、MAPKP38、JNK表達(dá)的變化。3、CCK-8法檢測地西他濱與RDA聯(lián)合給藥對QGY-7703肝癌細(xì)胞的抑制作用;Transwell實驗研究RDA與地西他濱聯(lián)合給藥對QGY-7703細(xì)胞侵襲、遷移的影響;Ann... 

【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

NF-κB作用機制（摘自維基百科）

Hek293T細(xì)胞（A為胰酶消化后的細(xì)胞，B是貼壁生長的細(xì)胞）

不同細(xì)胞系考察結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]竹節(jié)香附素A對人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖、凋亡、遷移及侵襲活性的影響[J]. 王宇,姜修博,韓豆,朱志銘,宋長琴,趙昂,張琪,劉昌輝,馬博.  中藥新藥與臨床藥理. 2018(02)
[2]NF-κB信號通路蛋白在木脂素對胃癌SGC-7901細(xì)胞抗增殖作用中的機制研究[J]. 焦璐,王瑩,呂游,李柱虎.  時珍國醫(yī)國藥. 2017(10)
[3]Aberrant control of NF-κB in cancer permits transcriptional and phenotypic plasticity, to curtail dependence on host tissue: molecular mode[J]. Spiros A.Vlahopoulos.  Cancer Biology & Medicine. 2017(03)
[4]中藥抗腫瘤有效成分研究進(jìn)展[J]. 項謙.  黑龍江醫(yī)藥. 2015(03)
[5]基于報告基因檢測的PXR、FXR和LXRα激動劑高通量篩選模型的建立[J]. 莊嘉瑯,曾行,鐘國平,金晶,茍曉麗,畢惠嫦,黃民.  中國藥理學(xué)通報. 2015(02)

博士論文
[1]潰結(jié)靈對NF-кB活化的IκBα磷酸化/泛素化的作用機制研究[D]. 唐立海.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2012

碩士論文
[1]雙熒光素酶報告基因檢測miR-185與AKT1靶標(biāo)關(guān)系[D]. 曹大龍.蚌埠醫(yī)學(xué)院 2015
[2]基于報告基因靶向NF-κB通路的抑制劑篩選及抗腫瘤活性研究[D]. 王秀娥.中國海洋大學(xué) 2012
[3]NF-κB p65亞基DNA結(jié)合域相互作用多肽的篩選及其功能鑒定[D]. 徐祥.第三軍醫(yī)大學(xué) 2002



本文編號：3210704