G蛋白偶聯(lián)受體（G protein-coupled receptors,GPCRs）超家族是人體內(nèi)最大的蛋白質(zhì)家族,分布于人體的各組織和細(xì)胞中,識(shí)別并結(jié)合外界信號(hào)分子,進(jìn)而調(diào)節(jié)下游信號(hào)通路,參與眾多生命過程。趨化因子受體CCR5屬于A型G蛋白偶聯(lián)受體家族,主要表達(dá)于中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面,參與調(diào)控T細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨嗜細(xì)胞的遷移、增殖以及炎癥免疫反應(yīng)等生物學(xué)功能。作為免疫細(xì)胞表面的重要受體,CCR5是多種病原體微生物侵染宿主免疫細(xì)胞的媒介,如1型人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus type 1,HIV-1）表面糖蛋白gp120和金黃色葡萄球菌分泌的殺白細(xì)胞素LukE（Leukocidin E）。作為HIV-1的共受體,CCR5成為各大藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)和公司公認(rèn)的抗HIV靶點(diǎn),但很多靶向CCR5的抗艾滋病毒藥物由于毒副作用或療效不佳等原因止步于臨床研究階段,僅有美國(guó)輝瑞公司研發(fā)的藥物maraviroc成功上市,但是該藥物存在臨床使用劑量大、毒副作用強(qiáng)等問題。開展基于CCR5結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計(jì)是解決上述問題的方案之一,對(duì)抗艾滋病毒新藥研發(fā)具有重要... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：123 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 G蛋白偶聯(lián)受體的研究概述
        1.1.1 G蛋白及其受體發(fā)現(xiàn)歷程
        1.1.2 G蛋白分類及下游通路
        1.1.3 G蛋白偶聯(lián)受體的生物學(xué)功能
        1.1.4 G蛋白偶聯(lián)受體的結(jié)構(gòu)研究與藥物發(fā)現(xiàn)
    1.2 趨化因子及其受體研究概述
        1.2.1 趨化因子及其受體分類及命名
        1.2.2 趨化因子受體結(jié)構(gòu)研究
        1.2.3 趨化因子受體CCR5及其拮抗劑的相關(guān)研究進(jìn)展
    1.3 金黃色葡萄球菌致病性研究概述
        1.3.1 金黃色葡萄球菌致病性與流行病學(xué)及耐藥
        1.3.2 成孔毒素蛋白的研究概述
        1.3.3 金黃色葡萄球菌殺白細(xì)胞素LukE與趨化因子受體相互作用研究概述
    1.4 本文的研究問題和目的
        1.4.1 擬解決的問題
        1.4.2 研究目的
第2章 趨化因子受體CCR5與新型拮抗劑的復(fù)合物結(jié)構(gòu)研究
    2.1 研究思路
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.3 CCR5新型拮抗劑
        2.2.4 蛋白樣品小量表達(dá)和純化
        2.2.5 受體蛋白與小分子拮抗劑復(fù)合物的性質(zhì)分析方法
        2.2.6 膜蛋白與小分子配體復(fù)合物的結(jié)晶
        2.2.7 蛋白晶體的衍射數(shù)據(jù)收集
        2.2.8 結(jié)構(gòu)解析
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 CCR5蛋白與小分子配體復(fù)合物穩(wěn)定性篩選
        2.3.2 大量蛋白純化實(shí)驗(yàn)和結(jié)晶條件篩選
        2.3.3 CCR5與臨床二期藥物小分子PF232798的復(fù)合物結(jié)構(gòu)
        2.3.4 CCR5與PF232798結(jié)合模式與構(gòu)效關(guān)系分析
        2.3.5 CCR5與新型CCR5拮抗劑結(jié)合的復(fù)合物結(jié)構(gòu)
第3章 趨化因子受體CCR5與金黃色葡萄球菌殺白細(xì)胞素蛋白LukE復(fù)合物的結(jié)構(gòu)研究
    3.1 研究思路
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.3 不同表達(dá)系統(tǒng)的篩選
        3.2.4 蛋白樣品純化
        3.2.5 親和力測(cè)定
        3.2.6 復(fù)合物樣品制備方法
        3.2.7 復(fù)合物樣品結(jié)晶與優(yōu)化
        3.2.8 負(fù)染電鏡復(fù)合物樣品制備及數(shù)據(jù)收集
        3.2.9 冷凍電鏡樣品制備和數(shù)據(jù)收集
        3.2.10 電鏡數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 LukE蛋白的表達(dá)純化
        3.3.2 復(fù)合物制備篩選結(jié)果
        3.3.3 復(fù)合物樣品結(jié)晶實(shí)驗(yàn)
        3.3.4 LukE-CCR5復(fù)合物的電鏡研究
        3.3.5 小結(jié)
第4章 總結(jié)與展望
    4.1 研究總結(jié)
    4.2 待解決的問題
    4.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號(hào)：3174560