癌癥是威脅人類健康與生命的一類重大疾病,目前尚無(wú)徹底治愈的方法,因此發(fā)現(xiàn)新的具有抗腫瘤活性的化合物以及研究其抗腫瘤機(jī)制是目前相關(guān)藥物研發(fā)的主要方向。p53基因是一種抑癌基因,與人類腫瘤密切相關(guān),其功能包括維持基因組穩(wěn)定、抑制并且阻止細(xì)胞轉(zhuǎn)化。超過(guò)一半的人類腫瘤與p53基因的突變有關(guān),并且另一半p53基因未突變的腫瘤中,p53基因的表達(dá)和功能受到了明顯的抑制。MDM2是p53基因的關(guān)鍵負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子。在腫瘤細(xì)胞中,MDM2基因高表達(dá),影響了p53蛋白的抑癌效果。而p53-MDM2相互作用的抑制劑能將p53蛋白從MDM2的抑制中釋放出來(lái),重新恢復(fù)p53蛋白“基因組衛(wèi)士”的功能,故p53-MDM2相互作用一直是抗癌藥物研發(fā)的重要靶標(biāo)。目前已發(fā)現(xiàn)多種新型的p53-MDM2抑制劑,但仍沒(méi)有相關(guān)藥物上市。本課題對(duì)cyz系列化合物使用p53-MDM2通路抑制劑篩選細(xì)胞模型進(jìn)行篩選,得到能誘導(dǎo)p53進(jìn)入細(xì)胞核的化合物;并通過(guò)cck8法測(cè)定活性化合物的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性,運(yùn)用免疫印跡、免疫組化等方法驗(yàn)證p53、MDM2和p21蛋白的表達(dá)量的變化,從而驗(yàn)證化合物對(duì)p53通路的激活作用。并且通過(guò)檢測(cè)Bax、... 

【文章來(lái)源】：華東師范大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 腫瘤相關(guān)知識(shí)
    1.2 p53-MDM2 通路的作用機(jī)制
        1.2.1 p53 的生物學(xué)特性
        1.2.2 MDM2 的生物學(xué)特性
        1.2.3 p53-MDM2 通路的作用機(jī)制
    1.3 論文研究的目的和意義
第二章 新型p53-MDM2 相互作用抑制劑的發(fā)現(xiàn)、驗(yàn)證及抗腫瘤作用分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株以及培養(yǎng)液
        2.1.2 試劑以及耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 待測(cè)化合物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 化合物對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用檢測(cè)
        2.2.3 p53-MDM2 Redistribution?Assay
        2.2.4 化合物對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響
        2.2.5 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.2.6 細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.2.7 免疫熒光檢測(cè)
        2.2.8 免疫印跡檢測(cè)
        2.2.9 體內(nèi)抗腫瘤活性檢測(cè)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 p53-MDM2 相互作用抑制劑的篩選
        2.3.2 不同基因型的腫瘤細(xì)胞驗(yàn)證p53-MDM2
        2.3.3 不同濃度cyz2017 誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)核情況
        2.3.4 cyz2017對(duì)HCT116 細(xì)胞p53-MDM2 通路蛋白表達(dá)的影響
        2.3.5 cyz2017 對(duì)不同p53 基因型腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用
        2.3.6 cyz2017對(duì)HCT116 細(xì)胞及細(xì)胞核形態(tài)的影響
        2.3.7 cyz2017對(duì)HCT116 細(xì)胞凋亡的影響
        2.3.8 cyz2017對(duì)HCT116 細(xì)胞周期的影響
        2.3.9 cyz2017 體內(nèi)抗腫瘤活性
    2.4 討論
第三章 cyz2017 化合物導(dǎo)致細(xì)胞聚合驗(yàn)證和初步探究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞株以及培養(yǎng)液
        3.1.2 試劑以及耗材
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞和細(xì)胞核形態(tài)學(xué)觀察
        3.2.2 免疫熒光檢測(cè)
        3.2.3 活細(xì)胞連續(xù)拍照觀察
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 cyz2017對(duì)HCT116 細(xì)胞和細(xì)胞核形態(tài)學(xué)觀察
        3.3.2 cyz2017 作用其他細(xì)胞時(shí)細(xì)胞聚合情況
    3.4 討論
第四章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間所獲得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3168265