癌癥是威脅人類健康與生命的一類重大疾病,目前尚無徹底治愈的方法,因此發(fā)現(xiàn)新的具有抗腫瘤活性的化合物以及研究其抗腫瘤機制是目前相關(guān)藥物研發(fā)的主要方向。p53基因是一種抑癌基因,與人類腫瘤密切相關(guān),其功能包括維持基因組穩(wěn)定、抑制并且阻止細胞轉(zhuǎn)化。超過一半的人類腫瘤與p53基因的突變有關(guān),并且另一半p53基因未突變的腫瘤中,p53基因的表達和功能受到了明顯的抑制。MDM2是p53基因的關(guān)鍵負反饋調(diào)節(jié)因子。在腫瘤細胞中,MDM2基因高表達,影響了p53蛋白的抑癌效果。而p53-MDM2相互作用的抑制劑能將p53蛋白從MDM2的抑制中釋放出來,重新恢復(fù)p53蛋白“基因組衛(wèi)士”的功能,故p53-MDM2相互作用一直是抗癌藥物研發(fā)的重要靶標(biāo)。目前已發(fā)現(xiàn)多種新型的p53-MDM2抑制劑,但仍沒有相關(guān)藥物上市。本課題對cyz系列化合物使用p53-MDM2通路抑制劑篩選細胞模型進行篩選,得到能誘導(dǎo)p53進入細胞核的化合物;并通過cck8法測定活性化合物的抗腫瘤細胞增殖活性,運用免疫印跡、免疫組化等方法驗證p53、MDM2和p21蛋白的表達量的變化,從而驗證化合物對p53通路的激活作用。并且通過檢測Bax、... 

【文章來源】：華東師范大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 腫瘤相關(guān)知識
    1.2 p53-MDM2 通路的作用機制
        1.2.1 p53 的生物學(xué)特性
        1.2.2 MDM2 的生物學(xué)特性
        1.2.3 p53-MDM2 通路的作用機制
    1.3 論文研究的目的和意義
第二章 新型p53-MDM2 相互作用抑制劑的發(fā)現(xiàn)、驗證及抗腫瘤作用分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株以及培養(yǎng)液
        2.1.2 試劑以及耗材
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 待測化合物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 化合物對細胞的增殖抑制作用檢測
        2.2.3 p53-MDM2 Redistribution?Assay
        2.2.4 化合物對細胞形態(tài)的影響
        2.2.5 細胞凋亡檢測
        2.2.6 細胞周期檢測
        2.2.7 免疫熒光檢測
        2.2.8 免疫印跡檢測
        2.2.9 體內(nèi)抗腫瘤活性檢測
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 p53-MDM2 相互作用抑制劑的篩選
        2.3.2 不同基因型的腫瘤細胞驗證p53-MDM2
        2.3.3 不同濃度cyz2017 誘導(dǎo)細胞進核情況
        2.3.4 cyz2017對HCT116 細胞p53-MDM2 通路蛋白表達的影響
        2.3.5 cyz2017 對不同p53 基因型腫瘤細胞增殖的抑制作用
        2.3.6 cyz2017對HCT116 細胞及細胞核形態(tài)的影響
        2.3.7 cyz2017對HCT116 細胞凋亡的影響
        2.3.8 cyz2017對HCT116 細胞周期的影響
        2.3.9 cyz2017 體內(nèi)抗腫瘤活性
    2.4 討論
第三章 cyz2017 化合物導(dǎo)致細胞聚合驗證和初步探究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞株以及培養(yǎng)液
        3.1.2 試劑以及耗材
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞和細胞核形態(tài)學(xué)觀察
        3.2.2 免疫熒光檢測
        3.2.3 活細胞連續(xù)拍照觀察
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 cyz2017對HCT116 細胞和細胞核形態(tài)學(xué)觀察
        3.3.2 cyz2017 作用其他細胞時細胞聚合情況
    3.4 討論
第四章 總結(jié)
參考文獻
在學(xué)期間所獲得的科研成果
致謝



本文編號：3168265