hERG通道是藥物心臟安全性評(píng)價(jià)的重要靶點(diǎn),同時(shí)還與多種腫瘤細(xì)胞的循環(huán)周期密切相關(guān),如:結(jié)腸癌,胃癌,惡性膠質(zhì)瘤和白血病。因此評(píng)價(jià)hERG通道在生物系統(tǒng)中的功能對(duì)了解腫瘤細(xì)胞的生理活動(dòng)特點(diǎn)以及藥物篩選具有重要的意義。目前,膜片鉗技術(shù)、放射性配體標(biāo)記和熒光分析法等一系列技術(shù)手段已用于hERG通道的功能評(píng)價(jià),但是這些技術(shù)手段在高通量、靈敏度、選擇性及環(huán)境友好型等方面仍然存在著缺陷,如:膜片鉗技術(shù)的低通量性,放射性配體標(biāo)記的放射性環(huán)境污染以及熒光分析法的低選擇性。為了高效、快速、準(zhǔn)確地了解hERG通道在生物系統(tǒng)中的作用,需要一種簡(jiǎn)單、高通量、特異性強(qiáng)、靈敏度高的分析方法。因此,我們基于新的靶向基團(tuán)——4-芐基苯胺設(shè)計(jì)了一個(gè)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的熒光探針CBH用于hERG通道熒光成像及標(biāo)記。通過(guò)電生理實(shí)驗(yàn)、熒光共聚焦成像和免疫熒光共定位等手段證明了CBH對(duì)hERG通道的高特異性。研究結(jié)果表明,探針CBH的熒光發(fā)射機(jī)制受溶劑致變色及分子旋轉(zhuǎn)雙重調(diào)控。雙重調(diào)控機(jī)制有效增大大了探針的熒光發(fā)射信號(hào),從而大大提高了CBH對(duì)hERG通道的靈敏性。此外,探針CBH的高靈敏性在hERG蛋白低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞中得到了進(jìn)一步印... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CBH的結(jié)構(gòu)和hERG蛋白作用機(jī)制

圖 2 CBH、ZBH、BBH 的合成路線3.2 CBH 的熒光和紫外光譜檢測(cè)探針 CBH 在 DMSO 溶解后，得到 CBH 儲(chǔ)備溶液（1 mM）。取 20 μl 儲(chǔ)備溶液

CBH 的紫外吸收光譜也發(fā)生了明顯的變化（圖2.1B）。為了解釋這一現(xiàn)象，我們?cè)诓煌壤?DMSO 組分中進(jìn)行了動(dòng)態(tài)光散射分析。如圖 1.2 所示，在含有 50%DMSO 的 DMSO/水體系中，CBH 的平均粒徑約為820 nm，表明 CBH 在這一體系中主要處于聚集狀態(tài)。而在含有 60% DMSO 體系中時(shí)，CBH 的粒徑大小幾乎無(wú)法檢測(cè)到，表明 CBH 處于完全分散的狀態(tài)�？紤]到兩種體系所對(duì)應(yīng)的熒光狀態(tài)變化，這種在聚集態(tài)下熒光發(fā)射變?nèi)跛坪跖c聚集致猝滅（ACQ）的現(xiàn)象一致。然而我們發(fā)現(xiàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Optopharmacological control of TRPC channels by coumarincaged lipids is associated with a phototoxic membrane effect[J]. Oleksandra Tiapko,Bernadett Bacsa,Gema Guedes de la Cruz,Toma Glasnov,Klaus Groschner.  Science China（Life Sciences）. 2016(08)
[2]抗心律失常藥物作用的靶點(diǎn)——HERG K+通道[J]. 關(guān)鳳英,楊世杰.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2007(07)



本文編號(hào)：3127510