目的:獲取含RGD靶向肽的乙肝核心病毒樣顆粒,為藥物靶向納米遞送系統(tǒng)提供一種新型載體。方法:將實驗室前期構建測序正確的含RGD修飾的乙肝核心病毒重組質粒轉化入大腸桿菌BL21（DE3）中,單因素分析及正交試驗探究重組蛋白最適表達條件。在最適表達條件下擴培,收集菌體超聲破碎后離心,采用凝膠過濾層析、離子交換和蔗糖密度梯度離心進行純化,利用透射電鏡對形成的RGD-HBc VLPs的形態(tài)及穩(wěn)定性進行鑒定。純化的RGD-HBc VLPs利用其體外自組裝的特性,將光敏劑ICG裝載到顆粒的內部,通過靜脈注射到4T1乳腺癌荷瘤小鼠,探究重組RGD-HBc VLPs作為納米遞送系統(tǒng)的靶向性。結果:RGD-HBc VLPs在溫度32℃、IPTG0.5mmol/L、誘導4h時以可溶性蛋白的形式得到高效表達。經蔗糖密度梯度離心純化后純度到達95%以上。透射電鏡下觀察純化的RGD-HBc VLPs形態(tài)、大小均一,直徑約為32nm,通過近紅外熒光活體成像證實了RGD-HBc作為納米載體的靶向性。結論:經表達和純化后,RGD-HBc VLPs具有較高的表達量和大小均一的形態(tài)外貌,近紅外熒光活體成像證實具有較好的靶... 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2020,40(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

RGD-HBC重組菌株的生長曲線

擴大培養(yǎng)后收集菌液，離心后超聲破碎，收集上清和沉淀，分別進行SDS-PAGE，如圖4所示。從電泳結果可以看出，目的蛋白主要存在于超聲破碎菌液的上清中，說明RGD-HBc重組蛋白以可溶性蛋白存在。圖3 RGD-HBC重組菌在不同條件下的誘導表達

RGD-HBC重組菌在不同條件下的誘導表達

【參考文獻】：
期刊論文
[1]靶向整合素αvβ3藥物的研究進展[J]. 劉莉,丁麗君.  中國新藥與臨床雜志. 2017(09)
[2]病毒樣顆粒及其原核表達制備的研究進展[J]. 于天飛,張喜文,謝鵬宇,黎明,樊興冬,閆冰.  生物學教學. 2016(10)

博士論文
[1]基于乙肝核心抗原病毒樣顆粒及其衍生物顆粒性質的純化和應用過程設計[D]. 李正軍.中國科學院大學(中國科學院過程工程研究所) 2018

碩士論文
[1]乙型肝炎病毒核心抗原相關抗原的克隆、表達及抗體制備[D]. 王鵬.第二軍醫(yī)大學 2014



本文編號：3097979